| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-23页 |
| ·鸡输卵管生物反应器的研究现状 | 第9-12页 |
| ·动物生物反应器的概念 | 第9-10页 |
| ·鸡输卵管生物反应器的概念及研究进展 | 第10-12页 |
| ·转基因鸡制备方法比较 | 第12页 |
| ·逆转录病毒的分子生物学 | 第12-17页 |
| ·逆转录病毒及其基因组结构 | 第13-15页 |
| ·逆转录病毒的生活周期 | 第15-16页 |
| ·逆转录病毒介导基因转移的一般过程 | 第16-17页 |
| ·复制缺陷型逆转录病毒载体系统 | 第17页 |
| ·特异性表达载体的构建 | 第17-21页 |
| ·输卵管上皮细胞组织特异性启动子 | 第17-20页 |
| ·信号肽 | 第20-21页 |
| ·功能基因及报告基因简介 | 第21页 |
| ·包装细胞系 | 第21-22页 |
| ·包装细胞 | 第21-22页 |
| ·VSV-G | 第22页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-43页 |
| ·实验材料 | 第23-28页 |
| ·菌株及细胞系 | 第23页 |
| ·载体 | 第23页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·药品 | 第23-24页 |
| ·试剂 | 第24-26页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26-27页 |
| ·仪器 | 第27-28页 |
| ·软件 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-43页 |
| ·输卵管上皮细胞的原代培养 | 第28页 |
| ·激素刺激雏鸡输卵管发育 | 第28-29页 |
| ·DAPI染色 | 第29页 |
| ·原代培养输卵管上皮细胞转染条件的摸索 | 第29-30页 |
| ·HEK293 包装细胞的复苏、培养及冻存 | 第30-31页 |
| ·pGag&Pol、pLN-GFP、pLN-sGFP转染HEK293 包装细胞 | 第31页 |
| ·培养细胞DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·组织DNA的提取 | 第32页 |
| ·卵清蛋白5′端调控区的PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·功能基因及报告基因的PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·DNA片段的回收 | 第34-35页 |
| ·PCR产物OV、GFP、sGFP、hEPO克隆入pMD-18T 载体 | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35-36页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒DNA | 第36页 |
| ·试剂盒法小量提取质粒DNA（华舜公司试剂盒） | 第36-37页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第37-38页 |
| ·质粒DNA的酶切 | 第38-39页 |
| ·OV与pM-GFP、pM-sGFP、pM-EPO的连接 | 第39页 |
| ·重组质粒DNA的酶切 | 第39页 |
| ·OV-GFP、OV-sGFP、OV-EPO片段连入pLNCX载体 | 第39-40页 |
| ·大提质粒 | 第40-41页 |
| ·稳转细胞系的PCR验证 | 第41-43页 |
| 第3章 鸡输卵管上皮细胞的原代培养 | 第43-48页 |
| ·鸡输卵管上皮原代细胞的培养 | 第43页 |
| ·DAPI染色后的细胞形态 | 第43-45页 |
| ·鸡输卵管上皮原代细胞转染条件的摸索 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·不同日龄母鸡输卵管上皮细胞的原代培养 | 第45-46页 |
| ·成纤维细胞污染去除 | 第46-47页 |
| ·培养器皿的处理 | 第47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第4章 鸡输卵管特异性表达载体的构建 | 第48-69页 |
| ·卵清蛋白5′端调控区的克隆并测序 | 第48-52页 |
| ·卵清蛋白5ˊ端调控区、报告基因及功能基因的克隆 | 第52-56页 |
| ·卵清蛋白5ˊ端调控区的克隆 | 第52-54页 |
| ·报告基因（GFP、sGFP）的克隆 | 第54-55页 |
| ·功能基因（hEPO)的克隆 | 第55-56页 |
| ·逆转录病毒重组载体的构建 | 第56-66页 |
| ·将鸡卵清蛋白5′调控序列克隆至pMD-GENE质粒 | 第56-58页 |
| ·将OV和GFP及EPO基因片断克隆至表达载体pLNCX | 第58-62页 |
| ·逆转录病毒重组载体的测序 | 第62-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| ·启动子长度的选择 | 第66-67页 |
| ·信号肽的导入 | 第67页 |
| ·卵清蛋白5' 调控序列与报告基因或功能基因的正确衔接 | 第67-68页 |
| ·本章小结 | 第68-69页 |
| 第5章 包装细胞系的构建 | 第69-74页 |
| ·pGag&Pol转染HEK293 细胞并筛选 | 第69页 |
| ·pLN-OV-GFP、pLN-OV-sGFP转染HEK293 细胞并筛选 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| ·细胞状态与密度对药物筛选的影响 | 第71-72页 |
| ·筛选药物的作用剂量 | 第72页 |
| ·细胞系的保存 | 第72-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 附录 | 第82-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
