| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 资源家系测定性状的英文缩写 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-32页 |
| 1 猪脂肪组织代谢调控及其内分泌功能的研究进展 | 第16-20页 |
| ·脂肪组织代谢的营养调控 | 第17页 |
| ·动物脂肪组织代谢的激素和酶类调控 | 第17-19页 |
| ·脂肪组织的内分泌功能的研究进展 | 第19-20页 |
| ·脂联素(adiponection) | 第19页 |
| ·抵抗素(resistin) | 第19-20页 |
| ·Visfatin | 第20页 |
| 2 基因的差异表达与杂种优势的遗传机理 | 第20-22页 |
| 3 mRNA差异显示技术(mRNA Differential Display PCR,DD-PCR) | 第22-27页 |
| ·原理 | 第22-23页 |
| ·DD-PCR的技术改进 | 第23-24页 |
| ·有序差异显示(Ordered Differential Display,ODD) | 第23-24页 |
| ·d差异显示(Delta Differential Display) | 第24页 |
| ·PACS(Differential mRNA fingerprinting by preferential amplification of coding sequences)法 | 第24页 |
| ·差异显示基因差异表达的阳性验证 | 第24-27页 |
| ·核酸分子杂交 | 第25页 |
| ·PCR技术 | 第25-27页 |
| 4.启动子功能性分析的研究策略 | 第27-32页 |
| ·真核生物启动子的结构 | 第27-28页 |
| ·真核生物启动子的种类 | 第27页 |
| ·RNA聚合酶Ⅱ启动子的结构 | 第27-28页 |
| ·TAIL-PCR法用于已知基因启动子序列的分离 | 第28-29页 |
| ·启动子功能性分析的方法 | 第29-32页 |
| 第二章 研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 第三章 材料和方法 | 第33-52页 |
| 1 材料 | 第33-36页 |
| ·试验样品 | 第33页 |
| ·用于总RNA提取的组织样品 | 第33页 |
| ·试验猪群与DNA样品 | 第33页 |
| ·主要仪器和设备 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34-36页 |
| ·试剂盒 | 第34页 |
| ·常规试剂 | 第34-35页 |
| ·载体和菌珠 | 第35-36页 |
| ·主要应用软件和数据库 | 第36页 |
| 2 试验方法 | 第36-52页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·SMART双链cDNA的合成 | 第37-38页 |
| ·DD-PCR | 第38页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第38页 |
| ·差异显示PCR | 第38页 |
| ·差异显示EST重扩增、克隆与测序 | 第38-41页 |
| ·差异显示EST重扩增与回收 | 第38-40页 |
| ·差异显示EST的克隆和测序 | 第40-41页 |
| ·产物连接 | 第40页 |
| ·DH5a感受态细胞制备 | 第40页 |
| ·转化 | 第40-41页 |
| ·PCR法鉴定阳性克隆、测序 | 第41页 |
| ·差异表达EST的半定量RT-PCR鉴定 | 第41页 |
| ·基于差异表达EST的cDNA全长的克隆 | 第41-43页 |
| ·电脑克隆 | 第41页 |
| ·RACE-PCR | 第41-43页 |
| ·差异基因的表达分析 | 第43-46页 |
| ·Real-Time PCR引物设计 | 第43页 |
| ·差异表达基因的进一步鉴定 | 第43-44页 |
| ·差异表达基因的组织表达谱分析 | 第44-46页 |
| ·差异基因的基因结构分析 | 第46页 |
| ·差异基因启动子序列的分离 | 第46-47页 |
| ·启动子功能分析 | 第47-51页 |
| ·猪ACL和IDH3B基因启动子区真核表达载体的构建 | 第47-49页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·双酶切 | 第47-49页 |
| ·连接 | 第49页 |
| ·重组质粒的原核表达鉴定 | 第49页 |
| ·质粒的抽提及酶切鉴定 | 第49页 |
| ·细胞培养和转染 | 第49-50页 |
| ·细胞培养 | 第49-50页 |
| ·瞬时转染 | 第50页 |
| ·细胞冻存与复苏 | 第50页 |
| ·荧光素酶相对活性测定与分析 | 第50-51页 |
| ·差异表达基因的多态性分析与SNP研究 | 第51-52页 |
| 第四章 结果与分析 | 第52-114页 |
| 1 组织总RNA的提取及反转录 | 第52页 |
| 2 SMART cDNA的合成 | 第52页 |
| 3 差异显示锚定引物的筛选 | 第52-54页 |
| 4 差异显示结果 | 第54-58页 |
| ·杂种与亲本间基因表达模式 | 第54页 |
| ·120日龄和180日龄杂种与亲本间基因表达模式比较 | 第54-55页 |
| ·差异显示EST的重扩增 | 第55-56页 |
| ·差异显示EST序列的同源性比对 | 第56-58页 |
| 5 基因差异表达的半定量RT-PCR验证 | 第58-60页 |
| 6 差异基因全长克隆以及序列分析 | 第60-82页 |
| ·F39(ACL: ATP citrate lyase) | 第60-65页 |
| ·F52(SMPX: small muscle protein, X-linked) | 第65-68页 |
| ·F55(ANGPTL4: angiopoietin-like 4) | 第68-71页 |
| ·F96(IDH1: NADP~+-isocitrate dehydrogenase) | 第71-75页 |
| ·S22(IDH3β: β subunit of NAD~+-isocitrate dehydrogenase) | 第75-78页 |
| ·S30(IDH3γ: γ subunit of NAD~+-isocitrate dehydrogenase) | 第78-80页 |
| ·S36(RPL28: ribosomal protein L28) | 第80-82页 |
| 7 差异基因的表达分析 | 第82-84页 |
| ·Real-timePCR进一步揭示基因的表达差异 | 第82-84页 |
| ·组织表达谱分析 | 第84页 |
| 8 差异基因的基因组结构分析及多态性研究 | 第84-92页 |
| ·ANGPTL4 | 第84-88页 |
| ·IDH1 | 第88页 |
| ·IDH3β | 第88-90页 |
| ·IDH3γ | 第90-92页 |
| 9 差异基因多态性与性状的关联分析 | 第92-107页 |
| ·ACL基因多态性与性状的关联分析 | 第92-98页 |
| ·ACL基因第24内含子插入突变多态性与性状的关联分析 | 第92-95页 |
| ·ACL基因XhoI-RFLP基因型与生产性状的关联分析 | 第95-98页 |
| ·ANGPTL4基因第3内含子单核苷酸多态性与生产性状的关联分析 | 第98-100页 |
| ·IDH3β基因多态性与性状的关联分析 | 第100-106页 |
| ·IDH3β基因11第内含子小卫星多态与性状的关联分析 | 第100-103页 |
| ·IDH3β基因5’侧翼区插入突变多态性与性状的关联分析 | 第103-106页 |
| ·IDH3γ基因第二内含子微卫星多态与性状的关联分析 | 第106-107页 |
| 10 ACL和IDH3β基因启动子功能的初步分析 | 第107-114页 |
| ·ACL和IDH3β基因5’侧翼序列的获得 | 第107-110页 |
| ·ACL和IDH3β基因启动子区重组质粒的构建 | 第110-111页 |
| ·ACL和IDH3β基因启动子重组质粒的活性测定与分析 | 第111-114页 |
| 第五章 讨论 | 第114-124页 |
| 1 关于mRNA差异显示技术 | 第114-115页 |
| ·mRNA差异显示技术作为本试验研究手段的优势 | 第114页 |
| ·降低mRNA差异显示技术假阳性率的措施 | 第114-115页 |
| 2 关于差异表达基因的鉴定 | 第115-116页 |
| 3 关于Real-time PCR技术 | 第116页 |
| ·PCR引物的设计 | 第116页 |
| ·PCR扩增条件的优化 | 第116页 |
| 4 关于差异表达基因 | 第116-120页 |
| ·ACL基因 | 第116-117页 |
| ·ANGPTL4基因 | 第117-118页 |
| ·IDH基因 | 第118-119页 |
| ·SMPX基因 | 第119页 |
| ·RPL28基因 | 第119-120页 |
| 5 关于猪新基因的组织表达谱分析 | 第120页 |
| 6 关于TAIL-PCR技术 | 第120-121页 |
| 7 关于双荧光素酶报告基因检测系统 | 第121页 |
| 8 关于分子标记的遗传效应 | 第121-123页 |
| ·ACL基因多态的遗传效应分析 | 第121-122页 |
| ·ANGPTL4基因第3内含子PCR-SSCP的遗传效应分析 | 第122页 |
| ·IDH3基因多态的遗传效应分析 | 第122-123页 |
| 9 关于下一步工作 | 第123-124页 |
| 小结 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-138页 |
| 附录 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
