| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-40页 |
| 1.猪圆环病毒的病原学特性 | 第14-16页 |
| ·分类地位 | 第14-15页 |
| ·病毒结构 | 第15页 |
| ·理化特性 | 第15页 |
| ·培养特性 | 第15-16页 |
| 2.猪圆环病毒的基因组结构与功能 | 第16-21页 |
| ·PCV基因组结构 | 第16-18页 |
| ·PCV基因组的复制与转录 | 第18页 |
| ·主要的编码蛋白 | 第18-21页 |
| 3.猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的致病机理 | 第21-26页 |
| ·对猪免疫系统的影响 | 第21-22页 |
| ·PCV2感染的不同组织嗜性 | 第22-23页 |
| ·PCV2引起的猪的A2型先天性震颤和怀孕母猪的繁殖障碍 | 第23-24页 |
| ·PCV2与其他病原微生物的协同作用 | 第24-25页 |
| ·免疫刺激对PCV2感染的促进作用 | 第25-26页 |
| 4.猪圆环病毒(PCV)基因的功能及其研究方法 | 第26-38页 |
| ·生物信息学技术 | 第26-28页 |
| ·基因的克隆与表达 | 第28-33页 |
| ·基因交换与基因重组 | 第33-36页 |
| ·定点诱变及基因缺失技术 | 第36-37页 |
| ·RNA干扰技术 | 第37-38页 |
| ·反向遗传学技术在PCV基因功能研究中的应用前景 | 第38页 |
| 5.选题背景及目的意义 | 第38-40页 |
| ·选题背景 | 第38-39页 |
| ·目的和意义 | 第39-40页 |
| 第二章 猪圆环病毒Ⅱ型全基因组的扩增及克隆 | 第40-55页 |
| 1.材料 | 第41页 |
| ·病料来源 | 第41页 |
| ·质粒与菌株 | 第41页 |
| ·主要酶和试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| 2.方法 | 第41-46页 |
| ·疑似猪圆环病毒Ⅱ型感染病料的检测 | 第41-42页 |
| ·病料处理及病毒DNA的提取 | 第41-42页 |
| ·疑似猪圆环病毒Ⅱ型的病料的PCR检测 | 第42页 |
| ·猪圆环病毒Ⅱ型CD株全基因组扩增 | 第42-43页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·PCV2全基因组的PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·PCV2全基因组的克隆 | 第43-46页 |
| ·重组质粒pMD18-T Simple-PCV2-CD的构建 | 第43-44页 |
| ·转化 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·PCV2-CD株全基因组的生物信息学分析 | 第46页 |
| 3.结果 | 第46-51页 |
| ·疑似PCV2病料的PCR检测 | 第46-47页 |
| ·PCR扩增结果 | 第47页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第48页 |
| ·序列测定与分析 | 第48-51页 |
| 4.讨论 | 第51-54页 |
| ·疑似PCV2感染病料的检测 | 第51-52页 |
| ·PCV2全基因组的PCR扩增获得 | 第52-53页 |
| ·pMD18-T Simple载体的优越性 | 第53页 |
| ·关于PCR扩增产物的克隆 | 第53-54页 |
| ·关于核苷酸同源性分析 | 第54页 |
| 5.结论 | 第54-55页 |
| 第三章 猪圆环病毒Ⅱ型ORF1、ORF3、ORF5基因缺失突变毒株的构建及感染性初步鉴定 | 第55-85页 |
| 1.材料 | 第56页 |
| ·病毒基因组、细胞 | 第56页 |
| ·质粒与菌株 | 第56页 |
| ·主要酶和试剂 | 第56页 |
| ·仪器设备 | 第56页 |
| 2.方法 | 第56-68页 |
| ·重组质粒中PCV2 ORF1、ORF3、ORF5基因单一酶切位点分析 | 第56-57页 |
| ·ORF1、ORF3、ORF5基因缺失重组质粒的构建 | 第57-63页 |
| ·基因缺失重组质粒的构建流程图 | 第57-60页 |
| ·重组质粒的大量制备与纯化 | 第60-61页 |
| ·酶切缺失及片段回收 | 第61-62页 |
| ·补平、连接 | 第62-63页 |
| ·转化 | 第63页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第63页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第63页 |
| ·基因缺失重组质粒的鉴定 | 第63-64页 |
| ·酶切鉴定 | 第63-64页 |
| ·序列测定 | 第64页 |
| ·PCV2 ORF1、ORF3、ORF5基因缺失突变毒株的构建 | 第64-65页 |
| ·缺失基因组的酶切回收 | 第64页 |
| ·体外连接环化 | 第64-65页 |
| ·连接产物的回收 | 第65页 |
| ·转染IBRS-2细胞 | 第65页 |
| ·基因缺失突变毒株在IBRS-2细胞中复制增殖的检测 | 第65-68页 |
| ·细胞中病毒DNA提取 | 第66页 |
| ·PCR扩增检测及PCR-RFLP检测 | 第66-68页 |
| ·电镜观察 | 第68页 |
| 3.结果 | 第68-80页 |
| ·PCV2 ORF1、ORF3、ORF5基因单一酶切位点的选择 | 第68-69页 |
| ·ORF1、ORF3、ORF5基因酶切及目的DNA电泳回收 | 第69页 |
| ·ORF1、ORF3、ORF5基因缺失重组质粒的酶切鉴定 | 第69-70页 |
| ·序列测定结果 | 第70-74页 |
| ·重组质粒的酶切及缺失基因组回收 | 第74-75页 |
| ·IBRS-2细胞中基因缺失突变毒株的检测结果 | 第75-76页 |
| ·电镜观察结果 | 第76-80页 |
| ·mPCV2-A观察结果 | 第77-78页 |
| ·mPCV2-C观察结果 | 第78页 |
| ·mPCV2-E观察结果 | 第78-79页 |
| ·PCV2-CD观察结果 | 第79-80页 |
| 4.讨论 | 第80-83页 |
| ·酶切位点及缺失方法的选择 | 第80-81页 |
| ·关于基因缺失突变毒株的构建 | 第81页 |
| ·基因缺失突变毒株检测方法的建立 | 第81-82页 |
| ·基因缺失突变毒株的感染性鉴定 | 第82-83页 |
| 5.结论 | 第83-85页 |
| 第四章 基因缺失突变毒株mPCV2-A、mPCV2-C和mPCV2-E对仔猪的致病性及免疫原性研究 | 第85-106页 |
| 1.材料 | 第85-86页 |
| ·种毒 | 第85页 |
| ·主要酶和试剂 | 第85-86页 |
| ·仪器设备 | 第86页 |
| ·试验动物 | 第86页 |
| 2.方法 | 第86-89页 |
| ·动物分组及接种 | 第86页 |
| ·PCV2基因缺失突变毒株在仔猪体内复制增殖的检测 | 第86-87页 |
| ·样品采集 | 第86页 |
| ·样品处理及病毒DNA的提取 | 第86-87页 |
| ·各缺失突变株的PCR及PCR-RFLP检测 | 第87页 |
| ·病理解剖变化及组织病理学观察 | 第87-88页 |
| ·外周血中CD3~+、CD4~+和CD8~+淋巴细胞的动态检测 | 第88页 |
| ·抗凝血的采集 | 第88页 |
| ·单抗标记及检测 | 第88页 |
| ·数据统计分析 | 第88页 |
| ·外周血中PCV2抗体的动态检测 | 第88-89页 |
| ·采血 | 第88页 |
| ·抗体检测 | 第88-89页 |
| ·数据统计分析 | 第89页 |
| 3.结果 | 第89-102页 |
| ·临床表现 | 第89页 |
| ·基因缺失突变对病毒在体内复制增殖的影响 | 第89-91页 |
| ·基因缺失对病毒组织侵蚀能力的影响 | 第91-96页 |
| ·病理解剖变化 | 第91页 |
| ·组织病理学观察结果 | 第91-96页 |
| ·基因缺失对外周血CD3+、CD4+和CD8+ T淋巴细胞含量的影响 | 第96-100页 |
| ·CD3~+ T淋巴细胞的动态变化 | 第96-98页 |
| ·CD4~+ T淋巴细胞的动态变化 | 第98-99页 |
| ·CD8~+ T淋巴细胞的动态变化 | 第99-100页 |
| ·基因缺失对外周血中PCV2抗体的影响 | 第100-102页 |
| 4.讨论 | 第102-105页 |
| ·关于基因缺失突变对病毒在体内复制增殖的影响 | 第102页 |
| ·关于基因缺失对病毒组织侵蚀能力的影响 | 第102-103页 |
| ·关于基因缺失对外周血CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞含量的影响 | 第103-104页 |
| ·关于基因缺失对外周血中PCV2抗体的影响 | 第104-105页 |
| 5.结论 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第122-123页 |
| 附录(测序图) | 第123-131页 |
