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番茄青枯病拮抗菌的筛选、鉴定和应用研究

第一章 引言第1-20页
   ·番茄青枯病研究进展第11-13页
     ·茄科劳尔氏菌的分类地位第11-12页
     ·茄科劳尔氏菌的存活、侵染和传播第12页
     ·番茄青枯病的防治第12-13页
   ·芽孢杆菌在植物病害生物防治中的应用第13-15页
     ·苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)第13页
     ·枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)第13-14页
     ·蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)第14页
     ·地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)第14页
     ·短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)第14-15页
   ·启动子克隆的几种方法第15-19页
     ·利用启动子探针载体克隆启动子第15页
     ·利用PCR技术克隆启动子第15-19页
   ·本研究的目的和意义第19-20页
第二章 番茄青枯病拮抗细菌的分离和筛选第20-26页
   ·试验材料第20-21页
     ·土样来源第20页
     ·供试病原菌和供试植物第20-21页
     ·培养基第21页
     ·实验器材第21页
   ·试验方法第21-23页
     ·致病力茄科劳尔氏菌的筛选和保存第21页
     ·菌株的分离和纯化第21页
     ·拮抗菌的初筛第21-22页
     ·拮抗菌的复筛第22页
     ·育苗土的制备第22页
     ·液体菌剂的制备第22页
     ·固体菌剂吸附基质的制备第22页
     ·固体菌剂的制备第22页
     ·拮抗菌株的温室盆栽试验第22-23页
     ·试验调查和数据的统计分析第23页
   ·结果与分析第23-25页
     ·分离及筛选结果第23-24页
     ·拮抗菌液体菌剂的防治效果第24-25页
     ·拮抗菌固体菌剂的防治效果第25页
   ·讨论第25-26页
第三章 番茄青枯病拮抗细菌X10的鉴定第26-36页
   ·试验材料第26页
     ·菌种和培养基第26页
     ·试剂和克隆载体第26页
   ·试验方法第26-31页
     ·培养特征和形态特征第26-27页
     ·生理生化特征第27-29页
     ·细菌X10的16S rDNA鉴定第29-31页
   ·结果第31-35页
     ·培养特征和形态特性第31-32页
     ·生理生化特征第32-33页
     ·菌株的16S rDNA鉴定第33-34页
     ·16S rDNA序列相似性分析第34-35页
   ·讨论第35-36页
第四章 侧孢短芽孢杆菌X10拮抗物质的提取和特性分析第36-43页
   ·试验材料第36页
     ·供试菌株第36页
     ·培养基第36页
   ·试验方法第36-38页
     ·菌体最适吸收波长和生长曲线的测定第36页
     ·拮抗物质抑菌活性测定第36-37页
     ·无菌滤液的制备第37页
     ·拮抗物质的提取第37页
     ·拮抗物质的稳定性测定第37-38页
     ·实验数据的统计分析第38页
   ·结果与分析第38-42页
     ·菌体最适吸收波长和生长曲线第38-39页
     ·无菌滤液对番茄青枯病原菌的拮抗作用第39页
     ·侧孢短芽孢杆菌X10无菌滤液盐析得到物质的拮抗作用第39页
     ·侧孢短芽孢杆菌X10无菌滤液乙醚萃取物的拮抗作用第39-40页
     ·拮抗物质对热的稳定性第40页
     ·拮抗物质对蛋白酶的稳定性第40-41页
     ·拮抗物质对氯仿的稳定性第41页
     ·拮抗物质对紫外线的稳定性第41页
     ·拮抗物质活性的有效时间第41-42页
     ·无菌滤液酸碱稳定性测定第42页
   ·讨论第42-43页
第五章 侧孢短芽孢杆菌X10田间应用效果评价第43-49页
   ·材料第43页
     ·供试菌株和培养基第43页
     ·田间小区试验地点和番茄品种第43页
     ·固体生防菌剂吸附基质第43页
   ·方法第43-45页
     ·固体菌剂的制备第43-44页
     ·山东莱阳露地小区试验第44页
     ·山东肥城蔬菜大棚小区试验第44页
     ·实验数据的统计分析第44-45页
   ·结果第45-48页
     ·山东莱阳露地小区试验结果第45-46页
     ·山东肥城蔬菜大棚小区试验结果第46-48页
   ·讨论第48-49页
第六章 启动子的克隆和GFP标记载体的构建第49-65页
   ·试验材料第49-50页
     ·菌株与质粒第49-50页
     ·培养基第50页
     ·抗生素及其工作浓度第50页
     ·酶和试剂第50页
   ·试验方法第50-55页
     ·质粒DNA的大量提取第50-51页
     ·质粒DNA的小量提取第51页
     ·质粒DNA酶切体系的建立第51页
     ·酶切片段的回收第51-52页
     ·启动子探针pUC19-GFP Bam H I酶切片段的脱磷酸化第52页
     ·X10总DNA的制备第52-53页
     ·X10总DNA Sau3A I酶切反应体系的建立第53页
     ·X10总DNA Sau3A I酶切片断与脱磷载体pUC19-GFP的粘端连接第53页
     ·大肠杆菌DHSa高效感受态细胞的制各第53-54页
     ·转化第54页
     ·阳性克隆子的筛选第54页
     ·克隆片段的序列测定第54页
     ·克隆片断的序列分析第54页
     ·GFP标记载体的构建第54页
     ·荧光检测与照相第54-55页
   ·结果与分析第55-64页
     ·芽孢杆菌X10总DNA的提取和Sau 3A I酶切第55页
     ·启动子文库的构建和阳性克隆子的筛选第55-57页
     ·启动子测序结果和分析第57-62页
     ·GFP标记载体的构建第62-64页
   ·讨论第64-65页
结论第65-66页
参考文献第66-72页
致谢第72-73页
作者简介第73页

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