| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 缩略词对照表 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.POD的分子结构及组成 | 第12-15页 |
| ·POD的分子结构特点 | 第12-14页 |
| ·POD序列上的保守性 | 第14-15页 |
| 2.POD的反应机理 | 第15页 |
| 3.POD的分离纯化研究 | 第15-16页 |
| 4.POD的生理作用及其相关的分子生物学研究 | 第16-19页 |
| ·木质化、木栓化和其它细胞壁代谢的研究 | 第16-17页 |
| ·生长素代谢 | 第17页 |
| ·创伤和病原体侵染 | 第17-18页 |
| ·褐变 | 第18页 |
| ·POD与PPO的关系 | 第18-19页 |
| 5.本研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 第一章 福眼龙眼果皮POD的分离纯化 | 第20-30页 |
| 1 材料与方法 | 第20-22页 |
| ·仪器与试剂 | 第20页 |
| ·POD的粗酶液提取及盐析分级 | 第20页 |
| ·POD过Streamline Phenyl柱分离 | 第20页 |
| ·POD过DEAE-Cellulose柱分离 | 第20-21页 |
| ·POD过Phenyl Sepharose柱分离 | 第21页 |
| ·POD过Superdex 200柱分离 | 第21页 |
| ·POD活性检测方法 | 第21页 |
| ·电泳检测 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE | 第21页 |
| ·双向电泳 | 第21页 |
| ·龙眼POD相对分子量的测定 | 第21-22页 |
| ·精确分子量测定 | 第22页 |
| 2.结果分析 | 第22-30页 |
| ·分离纯化结果分析 | 第22-24页 |
| ·SDS-PAGE及分子量测定结果分析 | 第24-28页 |
| ·SDS-PAGE结果分析 | 第24-26页 |
| ·龙眼果皮POD的相对分子量测定结果分析 | 第26-27页 |
| ·龙眼果皮POD的精确分子量测定结果分析 | 第27-28页 |
| ·双向电泳结果分析 | 第28-30页 |
| ·第一向等电聚焦(IEF)结果分析 | 第28-29页 |
| ·第二向电泳结果分析 | 第29-30页 |
| 第二章 POD的肽指纹图谱(MALDI-TOF)分析及串联质谱(ESI-Q-TOF2)测序 | 第30-38页 |
| 1 材料与方法 | 第31-32页 |
| ·样品的双向电泳 | 第31页 |
| ·肽的原位酶解 | 第31页 |
| ·肽段的提取 | 第31-32页 |
| ·MALDI-TOF分析 | 第32页 |
| ·ESI-QUAD-TOF2串联质谱测序 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-38页 |
| ·POD的MALDI-TOF分析 | 第33-34页 |
| ·POD的Q-TOF2分析 | 第34-38页 |
| ·PODA经Trypsin酶解消化后的ESI-MS分析 | 第34-36页 |
| ·肽段的ESI-MS/MS测序分析 | 第36-38页 |
| 第三章 龙眼果皮POD的cDNA克隆与原核表达 | 第38-61页 |
| 1.材料与方法 | 第38-47页 |
| ·仪器与试剂 | 第38页 |
| ·福眼果皮RNA提取及总RNA含量和浓度测定 | 第38-39页 |
| ·龙眼果皮POD cDNA保守区的克隆 | 第39-41页 |
| ·cDNA的合成 | 第39页 |
| ·RT-PCR | 第39-40页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第40页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第40页 |
| ·质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·3'RACE | 第41-43页 |
| ·3'RACE引物的设计 | 第41页 |
| ·cDNA的合成 | 第41-42页 |
| ·3'RACE | 第42-43页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第43页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第43页 |
| ·5'RACE | 第43-45页 |
| ·5'RACE引物的设计 | 第43页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第43-44页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第44页 |
| ·5'RACE | 第44-45页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第45页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第45页 |
| ·含酶切位点ORF的扩增 | 第45页 |
| ·龙眼果皮POD cDNA的原核表达 | 第45-47页 |
| ·载体酶切 | 第45-46页 |
| ·PCR回收产物酶切 | 第46页 |
| ·连接 | 第46页 |
| ·转化 | 第46页 |
| ·阳性克隆子的筛选 | 第46页 |
| ·测序 | 第46页 |
| ·p29-FPOD克隆至大肠杆菌表达宿主 | 第46-47页 |
| 2.结果与分析 | 第47-61页 |
| ·RNA的纯度及浓度鉴定 | 第47-48页 |
| ·POD全长cDNA的扩增结果 | 第48-52页 |
| ·保守区扩增结果 | 第48-49页 |
| ·3'RACE结果 | 第49-50页 |
| ·5'RACE结果 | 第50-52页 |
| ·FPOD cDNA编码的氨基酸序列分析 | 第52-56页 |
| ·FPOD cDNA编码的氨基酸与第Ⅲ类POD模型的比对 | 第52-53页 |
| ·FPOD ORF推导的氨基酸与其它POD氨基酸序列比对 | 第53-54页 |
| ·FPOD cDNA编码的氨基酸的性质及组成 | 第54-55页 |
| ·串联质谱结果与POD氨基酸序列的比对分析 | 第55-56页 |
| ·龙眼果皮POD cDNA的原核表达 | 第56-61页 |
| ·FPOD ORF的扩增结果 | 第56-58页 |
| ·FPOD cDNA插入载体pET-29a及其在E.coli.中的表达 | 第58-61页 |
| 第四章 小结与讨论 | 第61-64页 |
| 1.POD的分离纯化 | 第61-62页 |
| 2.POD的肽指纹图谱分析及串联质谱测序 | 第62页 |
| 3.龙眼果皮POD的cDNA克隆与原核表达 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 在学期间发表的相关论文 | 第77页 |
