| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 中文文摘 | 第6-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-36页 |
| ·课题背景 | 第14-15页 |
| ·低温酶的研究进展 | 第15-36页 |
| ·简介 | 第15-16页 |
| ·低温酶的酶学特性 | 第16-18页 |
| ·低温酶的高催化活性 | 第17页 |
| ·低温酶的最适作用温度低,热稳定性差 | 第17-18页 |
| ·低温酶的适应不完全 | 第18页 |
| ·低温酶的分子结构特征 | 第18-23页 |
| ·活性、稳定性与柔顺性 | 第23-27页 |
| ·柔顺性 | 第24-25页 |
| ·稳定性(热稳定性) | 第25-27页 |
| ·柔顺性与稳定性 | 第27页 |
| ·低温酶的应用优势 | 第27-29页 |
| ·低温酶的获取 | 第29-36页 |
| ·自然选育 | 第29-30页 |
| ·突变选育 | 第30-36页 |
| 第2章 材料与方法 | 第36-54页 |
| ·材料 | 第36-39页 |
| ·实验方法 | 第39-54页 |
| ·扩展青霉碱性脂肪酶基因多拷贝工程菌的构建及表达 | 第39-46页 |
| ·目的基因的获得 | 第39页 |
| ·克隆载体pSK-lip(dE)的构建 | 第39-40页 |
| ·载体pSK-lip(dE)的转化与筛选 | 第40-41页 |
| ·重组质粒DNA的制备 | 第41-42页 |
| ·多拷贝表达载体pAO815-xlip的构建 | 第42-43页 |
| ·多拷贝基因在巴斯德毕赤酵母中GS115的表达 | 第43-44页 |
| ·表达产物PEL-GS的鉴定 | 第44-45页 |
| ·发酵上清脂肪酶酶活的测定 | 第45-46页 |
| ·GS-pAO815-xlip发酵条件的优化 | 第46页 |
| ·Lip-PXD定点突变 | 第46-48页 |
| ·突变基因的获得(重叠延伸PCR) | 第46-47页 |
| ·突变体克隆载体的构建 | 第47页 |
| ·突变体表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·突变基因在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达 | 第48页 |
| ·表达蛋白PEL-PXD-GS酶学性质的研究 | 第48页 |
| ·Lip-ep8-PXD和Lip-P150S定点突变 | 第48-49页 |
| ·Lip-P239A定点突变 | 第49-51页 |
| ·Lip-I164A定点突变 | 第51-54页 |
| 第3章 结果与分析 | 第54-78页 |
| ·扩展青霉碱性脂肪酶基因多拷贝工程菌的构建及表达 | 第54-62页 |
| ·多拷贝表达载体pAO815-xlip的构建及鉴定 | 第54-55页 |
| ·多拷贝工程菌GS-pAO815-xlip的筛选 | 第55页 |
| ·GS-pAO815-xlip的表达及产物的鉴定 | 第55-59页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第55-58页 |
| ·表达产物的活性检测 | 第58-59页 |
| ·GS-pAO815-xlip发酵条件的优化 | 第59-62页 |
| ·不同诱导起始菌体密度对GS-pAO815-3lip表达的影响 | 第59页 |
| ·不同甲醇诱导浓度对GS-pAO815-3lip表达的影响 | 第59-60页 |
| ·不同培养基起始pH对GS-pAO815-3lip表达的影响 | 第60-62页 |
| ·定点突变 | 第62-78页 |
| ·突变点的选择 | 第62-63页 |
| ·Lip-PXD定点突变 | 第63-66页 |
| ·突变基因lip-PXD的获得 | 第63-64页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第64-65页 |
| ·PEL-PXD-GS最适作用温度和热稳定性的研究 | 第65-66页 |
| ·Lip-ep8-PXD定点突变 | 第66-69页 |
| ·突变基因lip-ep8-PXD的获得 | 第66-67页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第67-68页 |
| ·PEL-ep8-PXD-GS最适作用温度和热稳定性的研究 | 第68-69页 |
| ·Lip-P150S定点突变 | 第69-72页 |
| ·突变基因lip-P150S的获得 | 第69页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第69-71页 |
| ·PEL-P150S-GS最适作用温度和热稳定性的研究 | 第71-72页 |
| ·Lip-P239A定点突变 | 第72-75页 |
| ·突变基因lip-P239A的获得 | 第72-73页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第73-74页 |
| ·PEL-P239A-GS最适作用温度和热稳定性的研究 | 第74-75页 |
| ·Lip-I164A定点突变 | 第75-78页 |
| ·突变基因lip-I164A的获得 | 第75-76页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第76页 |
| ·PEL-I164A-GS最适作用温度和热稳定性的研究 | 第76-78页 |
| 第4章 讨论 | 第78-82页 |
| 结论 | 第82-85页 |
| 附录 英文缩略词表 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 个人简历 | 第96-97页 |
| 福建师范大学学位论文使用授权声明 | 第97页 |
