| 第一部分 前言 | 第1-16页 |
| 1 研究背景 | 第6-7页 |
| 2 酵母表达系统的概述 | 第7-15页 |
| ·质粒载体 | 第7页 |
| ·转化和筛选 | 第7-9页 |
| ·外源基因表达的相关元件 | 第9页 |
| ·翻译后的加工 | 第9-10页 |
| ·常用的几种酵母表达系统 | 第10-15页 |
| ·酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）表达系统 | 第10页 |
| ·栗酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）表达系统 | 第10-11页 |
| ·甲醇型酵母 | 第11-15页 |
| ·乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）表达系统 | 第15页 |
| ·解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）表达系统 | 第15页 |
| 3 实验目的与主要内容 | 第15-16页 |
| 第二部分 猪﹙空﹚肠道定植酵母菌的分离与鉴定 | 第16-24页 |
| 1 材料与方法 | 第16-21页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·菌种来源 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·仪器 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-21页 |
| ·猪空肠的采集与保存 | 第18页 |
| ·猪空肠定植酵母菌的分离 | 第18页 |
| ·猪空肠定植酵母菌的纯化与保存 | 第18页 |
| ·猪肠道定植酵母菌的形态学和生理生化特征鉴定 | 第18-20页 |
| ·猪肠道定植酵母菌基因组 DNA 的提取 | 第20页 |
| ·猪肠道定植酵母菌rDNA 片段扩增和测序 | 第20-21页 |
| ·通过对猪肠道定植酵母菌rDNA 序列分析显示其在系统树中的位置 | 第21页 |
| 2 结果 | 第21-24页 |
| ·猪肠道定植酵母菌的形态学和生理生化特征鉴定结果 | 第21-22页 |
| ·猪肠道定植酵母菌在系统树中的位置 | 第22-24页 |
| 3 讨论 | 第24页 |
| 第三部分 β-甘露聚糖酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第24-37页 |
| 1 材料与方法 | 第24-33页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第24-25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-33页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第26-28页 |
| ·分光光度法测定 DNA 的浓度与纯度 | 第28-29页 |
| ·PCR 反应引物的设计及 PCR 扩增反应 | 第29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第30页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第30-31页 |
| ·酵母表达载体pPIC9K-ManⅠ的构建及阳性重组子的筛选鉴定 | 第31页 |
| ·酵母G5115 感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·重组质粒pPIC9K-ManⅠ转化 G5115 及阳性转化子的筛选 | 第31页 |
| ·重组酵母的培养、诱导表达及检测 | 第31页 |
| ·重组β-甘露聚糖酶活性的检测 | 第31-32页 |
| ·其他 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-36页 |
| ·质粒pT002-ManⅠ的提取 | 第33页 |
| ·质粒pT002-ManⅠ中 ManⅠ基因的获得 | 第33页 |
| ·重组质粒 T-ManⅠ的筛选鉴定 | 第33-35页 |
| ·表达载体pPIC9K-ManⅠ的构建及筛选鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pPIC9K-ManⅠ对毕赤酵母的转化及阳性转化子的筛选 | 第36页 |
| ·重组β-甘露聚糖酶的检测及活力测定 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-37页 |
| 第四部分 结论 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-44页 |
| 附录 | 第44-48页 |
| 作者简介 | 第48页 |
