| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-46页 |
| 猪圆环病毒2型研究进展 | 第16-46页 |
| 1.病原学研究 | 第16-26页 |
| ·PCV2的发现 | 第16-17页 |
| ·PCV2的形态和理化特性 | 第17页 |
| ·PCV2的分类地位 | 第17-19页 |
| ·PCV2的分子生物学特征 | 第19-26页 |
| 2.流行病学研究 | 第26-29页 |
| ·PCV2流行情况及分布 | 第26-27页 |
| ·易感动物 | 第27-28页 |
| ·传播方式及途径 | 第28-29页 |
| 3.PCV2致病机理研究 | 第29-30页 |
| ·PCV2导致免疫系统病理的变化 | 第29页 |
| ·PCV2导致外周血淋巴细胞的变化 | 第29-30页 |
| 4.PCV2检测技术 | 第30-32页 |
| ·PCR技术 | 第30页 |
| ·原位杂交 | 第30-31页 |
| ·间接免疫荧光实验 | 第31页 |
| ·免疫过氧化物酶单层细胞实验 | 第31页 |
| ·酶联免疫吸附实验 | 第31-32页 |
| 5.与PCV2相关猪病 | 第32-39页 |
| ·断奶后仔猪多系统衰竭综合症 | 第32-34页 |
| ·猪肾病与皮炎综合症 | 第34-36页 |
| ·猪呼吸疾病综合症 | 第36-38页 |
| ·母猪繁殖障碍 | 第38页 |
| ·肉芽肿性肠炎 | 第38-39页 |
| ·仔猪先天性震颤 | 第39页 |
| 6.TTV相关病毒 | 第39-46页 |
| ·TTV相关病毒的发现及分类 | 第39-40页 |
| ·TTV的基因组结构特征 | 第40-41页 |
| ·TTV的复制与转录 | 第41-42页 |
| ·TTV的致病性 | 第42-43页 |
| ·TTV的流行病学及检测 | 第43-44页 |
| ·猪TTV | 第44-45页 |
| ·PCV2与TTV的关系 | 第45-46页 |
| 第二部分 研究内容 | 第46-133页 |
| 第一章 PCV2分离和全基因组的克隆及序列分析 | 第46-64页 |
| 1.材料与方法 | 第47-53页 |
| ·病料来源、细胞、载体与试剂 | 第47-48页 |
| ·PCV2型病毒检测引物与全基因引物的设计 | 第48页 |
| ·病料PCV2检测 | 第48-49页 |
| ·PCV2病毒分离 | 第49页 |
| ·PCV2分离株TCID_(50)测定 | 第49页 |
| ·病毒蔗糖密度梯度离心纯化与形态观察 | 第49页 |
| ·分离毒株全基因组扩增 | 第49-50页 |
| ·分离毒株全基因组的克隆与序列分析 | 第50-53页 |
| 2.结果 | 第53-61页 |
| ·病料组织的PCR检测 | 第53页 |
| ·病毒分离与毒力检测 | 第53-54页 |
| ·病毒纯化与病毒形态 | 第54-55页 |
| ·PCV2分离毒株全基因组的克隆与序列测定 | 第55页 |
| ·PCV2分离毒株全基因组序列结构分析 | 第55-57页 |
| ·不同年份浙江省分离毒株的突变位点分析 | 第57-58页 |
| ·分离毒株的同源性与进化 | 第58-60页 |
| ·ORF1核苷酸及推导氨基酸序列分析 | 第60页 |
| ·ORF2核苷酸及推导氨基酸序列分析 | 第60-61页 |
| ·ORF3核苷酸及推导氨基酸序列分析 | 第61页 |
| 3.讨论 | 第61-64页 |
| 第二章 PCV2在猪群中感染的血清流行病学调查 | 第64-74页 |
| 1.材料与方法 | 第65-66页 |
| ·病毒、血清、细胞与试剂 | 第65页 |
| ·猪血清样本收集 | 第65页 |
| ·IFA试验 | 第65-66页 |
| ·ELISA试验 | 第66页 |
| ·统计分析 | 第66页 |
| 2.结果 | 第66-72页 |
| ·猪场及猪群的PCV2阳性率 | 第66页 |
| ·不同年龄段猪的PCV2感染 | 第66-67页 |
| ·不同年份采集样品的PCV2抗体阳性率 | 第67-68页 |
| ·浙江不同地区猪PCV2抗体阳性 | 第68页 |
| ·猪的年龄、品种与PCV2血清阳性率 | 第68-69页 |
| ·仔猪及种猪与PCV2血清阳性率 | 第69页 |
| ·PCV2感染与PRV及PRRS疫苗免疫应答 | 第69-70页 |
| ·同一猪群中PCV2感染与PRRSV感染相关性分析 | 第70-72页 |
| 3.讨论 | 第72-74页 |
| 第三章 人群及其他动物中PCV2相关抗体的血清学调查 | 第74-92页 |
| 1.材料与方法 | 第75-79页 |
| ·病毒、细胞、血清与试剂 | 第75-76页 |
| ·人血清样本的收集 | 第76页 |
| ·奶牛、鸡、鸭和山羊血清样本的收集 | 第76页 |
| ·IFA试验 | 第76页 |
| ·IPMA试验 | 第76-77页 |
| ·人TTV、TTMV和猪TTV基因序列的收集和序列分析 | 第77页 |
| ·人血清间接ELISA方法的建立 | 第77-79页 |
| ·血清样品检测 | 第79页 |
| ·统计分析 | 第79页 |
| 2.结果 | 第79-90页 |
| ·研究人群的人口统计学 | 第79-80页 |
| ·PCV2在师生中流行情况 | 第80页 |
| ·不同年份收集血清PCV2相关抗体阳性率 | 第80-81页 |
| ·不同地区PCV2相关抗体阳性率 | 第81页 |
| ·PCV2相关抗体阳性率与年龄、性别、地区、HBV和ALT | 第81页 |
| ·ALT和HBV检测结果 | 第81-84页 |
| ·其他动物血清检测结果 | 第84页 |
| ·人TTV、TTMV和猪TTV与PCV2的进化分析 | 第84-86页 |
| ·间接ELISA最佳反应条件的优化 | 第86-89页 |
| ·间接ELISA特异性敏感性试验 | 第89-90页 |
| ·血清样品检测 | 第90页 |
| 3.讨论 | 第90-92页 |
| 第四章 PCV2感染性克隆及突变体的构建与体外复制能力研究 | 第92-103页 |
| 1.材料与方法 | 第93-97页 |
| ·细胞、病毒与试剂 | 第93-94页 |
| ·正常感染性克隆及突变体引物设计 | 第94页 |
| ·病毒DNA模板制备 | 第94-95页 |
| ·pMD18-T-PCV2重组质粒构建 | 第95页 |
| ·单突变位点突变体的构建 | 第95-96页 |
| ·双突变位点突变体的构建 | 第96页 |
| ·DNA环化、细胞转染及检测 | 第96-97页 |
| ·感染性试验和TCID_(50)测定 | 第97页 |
| 2.结果 | 第97-101页 |
| ·PCV2分子克隆载体构建及鉴定 | 第97页 |
| ·突变体的构建及鉴定 | 第97-98页 |
| ·正常感染性克隆及各ORF缺失突变体PK-15细胞转染结果 | 第98-99页 |
| ·正常感染性克隆及突变体在PK-15细胞上的感染性和复制能力 | 第99-101页 |
| 3.讨论 | 第101-103页 |
| 第五章 PCV2感染性克隆及其突变体对BALB/C小鼠致病性研究 | 第103-118页 |
| 1.材料与方法 | 第104-107页 |
| ·细胞、毒株、试验动物、试剂 | 第104-105页 |
| ·攻毒试验 | 第105页 |
| ·感染性克隆及突变体体内致病性和凋亡性测定方案 | 第105-107页 |
| 2.结果 | 第107-115页 |
| ·各组间PCV2抗体消长规律 | 第107-110页 |
| ·小鼠感染后PCV2病毒血症的检测结果 | 第110页 |
| ·接种小鼠脾脏的组织病理学观察结果 | 第110-111页 |
| ·CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞测定结果 | 第111-112页 |
| ·鼠脾脏内细胞凋亡流式分析结果 | 第112页 |
| ·脾脏细胞内凋亡途经的检测结果 | 第112-115页 |
| 3.讨论 | 第115-118页 |
| 全文总结 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-133页 |
| 第三部分 附录 | 第133-145页 |
| 附录A 常用试剂及仪器 | 第133-135页 |
| 附录B 常用缓冲液及培养基配方 | 第135-144页 |
| 附录C 攻博期间发表或录用的学术论文 | 第144-145页 |
| 致谢 | 第145页 |
