| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-47页 |
| 一 HIV颗粒 | 第12-27页 |
| ·HIV基因组RNA | 第12-14页 |
| ·HIV的转录和蛋白 | 第14-15页 |
| ·HIV的LTR和15个蛋白质的功能 | 第15-24页 |
| ·长末端重复区(long terminal repeat，LTR) | 第15-17页 |
| ·病毒调节蛋白 | 第17-18页 |
| Tat(Transactivator) | 第17-18页 |
| Rev(Regulator of viral protein) | 第18页 |
| ·病毒附属蛋白 | 第18-20页 |
| Vpu(Viral protein U) | 第19页 |
| Nef(Negative regulation factor) | 第19页 |
| Vif(viral infectivity factor) | 第19-20页 |
| Vpr(viral protein R) | 第20页 |
| ·病毒结构蛋白 | 第20-21页 |
| 基质蛋白MA，matrix) | 第20页 |
| 衣壳蛋白(CA，capsid) | 第20-21页 |
| 核衣壳(NC，nucleocapsid) | 第21页 |
| p6蛋白 | 第21页 |
| ·病毒酶 | 第21-23页 |
| 蛋白酶(PR，protease) | 第21-22页 |
| 逆转录酶(RT，reverse transcriptase) | 第22页 |
| 整合酶(IN，integrase) | 第22-23页 |
| ·病毒表面膜蛋白 | 第23-24页 |
| 表面膜蛋白(SU，surface gp120) | 第23-24页 |
| 跨膜蛋白(TM，gp41) | 第24页 |
| ·HIV-1的复制周期 | 第24-26页 |
| 病毒感染新细胞 | 第25页 |
| 病毒基因组整合入染色体 | 第25页 |
| 病毒基因的表达 | 第25-26页 |
| 产生病毒颗粒 | 第26页 |
| ·HIV-1复制的细胞内调控 | 第26-27页 |
| ·HIV-1的高度变异性 | 第27页 |
| 二 HIV-1的遗传型 | 第27-36页 |
| ·现有亚型 | 第27-28页 |
| ·亚型的定义 | 第28-29页 |
| ·M组 | 第29-30页 |
| ·O组 | 第30-31页 |
| ·HIV-1遗传型的地理分布 | 第31-32页 |
| ·HIV-1遗传亚型的研究方法 | 第32-35页 |
| 策略 | 第33页 |
| 测序 | 第33-34页 |
| 系统进化树分析 | 第34-35页 |
| ·亚型和流行病学 | 第35-36页 |
| 三 HIV多样性与生物学特性、传染能力和致病性 | 第36-38页 |
| 四 HIV多样性与药物治疗 | 第38-40页 |
| ·各个亚型对于抗病毒药物敏感性的差别 | 第38-39页 |
| ·耐药突变对抗病毒药物的影响 | 第39-40页 |
| 五 HIV-1 遗传多样性与疫苗研发 | 第40-43页 |
| ·HIV-1亚型和中和抗体反应 | 第41-42页 |
| ·HIV-1亚型和细胞介导的免疫反应 | 第42页 |
| ·在动物模型中对攻击性保护的研究 | 第42-43页 |
| 六 构建中国中部地区的HIV-1流行株全长分子克隆和侵染性克隆的背景、目的和意义 | 第43-47页 |
| 第二章 实验研究 | 第47-92页 |
| 一 研究对象 | 第47-48页 |
| 二 研究试材 | 第48-54页 |
| ·细胞系和菌种 | 第48页 |
| 细胞系 | 第48页 |
| 菌种 | 第48页 |
| ·细胞培养试剂 | 第48-49页 |
| ·特殊细胞培养及相关缓冲液配方 | 第49页 |
| ·细菌培养基 | 第49页 |
| ·工具酶 | 第49-50页 |
| ·PCR反应 | 第50页 |
| ·试剂盒 | 第50页 |
| ·质粒提取相关溶液 | 第50-51页 |
| ·感受态细胞制备溶液 | 第51页 |
| ·蛋白质凝胶电泳和免疫印迹 | 第51-52页 |
| ·Luciferase Assay | 第52页 |
| ·主要试验仪器： | 第52-54页 |
| 三 研究方法 | 第54-70页 |
| ·从HIV-1阳性患者外周血单细跑(PBMC)中分离基因组DNA | 第54-55页 |
| ·外周血单核细胞(PBMC)的分离与培养 | 第54页 |
| ·HIV-1阳性患者外周血单核细胞(PBMC)与健康人的外周血单核细胞共培养： | 第54-55页 |
| ·HIV-1阳性患者的外周血单核细胞中提取基因组DNA | 第55页 |
| ·巢式聚合酶链式反应(PCR)分离HIV-1基因组DNA | 第55-57页 |
| ·引物的设计 | 第55-56页 |
| ·巢式PCR方法分离HIV-1基因组DNA | 第56-57页 |
| ·HIV-1基因组DNA的克隆 | 第57-60页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分离并纯化PCR产物 | 第57页 |
| ·分离纯化后的PCR产物克隆入T载体 | 第57-60页 |
| ·菌种的活化与保存 | 第57页 |
| ·大肠杆菌高效感受态细胞的制备 | 第57-58页 |
| ·质粒的转化 | 第58页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第58-59页 |
| ·限制性内切酶反应 | 第59页 |
| ·载体去磷酸化 | 第59页 |
| ·PCR或酶反应产物去除缓冲液 | 第59页 |
| ·PCR或酶切产物片断克隆入质粒载体 | 第59-60页 |
| ·HIV-1全长基因组序列测定、比对与分析 | 第60页 |
| ·HIV-1侵染性分子克隆的构建 | 第60-62页 |
| ·HIV-1全长基因组序列酶切图谱分析 | 第60页 |
| ·构建HIV-1侵染性克隆 | 第60-62页 |
| ·构建02HNsq4的5`端克隆：5`-02HNsq4 | 第61页 |
| ·构建02HNsc11的5`端克隆：5`-02HNsc11 | 第61页 |
| ·构建02HNsc11的3`端克隆：3`-02HNsc11 | 第61-62页 |
| ·利有02HNsmx2的ENV基因序列，改造3`-02HNsc11，构建镶嵌3`端克隆：3`-02HNsc11-smx2 | 第62页 |
| ·传代细施的培养冻存和复苏 | 第62-63页 |
| ·HIV-1侵染性克隆转染293T细胞产生并收获HIV-1病毒 | 第63-65页 |
| ·去内毒素试剂盒提取HIV-1侵染性克隆质粒DNA | 第63-64页 |
| ·HIV-1侵染性克隆转染293T细胞产生并收获HIV-1病毒(图 | 第64-65页 |
| ·CEM174.5.25细胞增殖HIV-1病毒 | 第65页 |
| ·转染后的293T与HOS-CD4-CCR5和HOS-CD4-CXCR4的细胞融合试验 | 第65页 |
| ·使用p24抗原ELISA检测试剂盒定量病毒 | 第65-67页 |
| ·基于TZM-b1细胞的荧光素酶反应测定病毒感染性 | 第67页 |
| ·蛋白质凝胶电泳和免疫印迹检测病毒蛋白质表达 | 第67-70页 |
| ·HIV阳性血清体外灭活 | 第67页 |
| ·病毒裂解液样品制备 | 第67-68页 |
| ·蛋白质质凝胶电泳 | 第68页 |
| ·免疫印迹检测病毒蛋白质表达 | 第68-70页 |
| 四 研究结果 | 第70-92页 |
| ·所有3个来自河南省的HIV-1全长克隆都是B’亚型 | 第70-76页 |
| ·3个河南HIV-1全长基因组中的功能结构域分析 | 第76-82页 |
| ·HIV-1B’侵染性克隆的构建及其生物特性的初步研究 | 第82-88页 |
| ·HIV-1B’侵染性克隆的感染靶细胞能力和复制能力的初步研究 | 第88-92页 |
| 第三章 讨论 | 第92-97页 |
| 中外文参考文献 | 第97-111页 |
| 博士期间已发表和待发表论文 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
