| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 β-半乳糖苷酶的简介 | 第10-11页 |
| 1.1.1 β-半乳糖苷酶的定义 | 第10页 |
| 1.1.2 β-半乳糖苷酶的来源和比较 | 第10页 |
| 1.1.3 β-半乳糖苷酶的催化机制 | 第10-11页 |
| 1.2 β-半乳糖苷酶的应用 | 第11-13页 |
| 1.2.1 β-半乳糖苷酶在医药面的应用 | 第11-12页 |
| 1.2.2 β-半乳糖苷酶在食品方面的应用 | 第12页 |
| 1.2.3 β-半乳糖苷酶在环境保护方面的应用 | 第12页 |
| 1.2.4 β-半乳糖苷酶在基因工程方面的应用 | 第12-13页 |
| 1.3 产β-半乳糖苷酶菌株的培育 | 第13-15页 |
| 1.3.1 β-半乳糖苷酶的提取 | 第13页 |
| 1.3.2 β-半乳糖苷酶菌株的选育 | 第13-15页 |
| 1.4 提高蛋白表达水平的策略 | 第15-18页 |
| 1.4.1 密码子优化 | 第15-17页 |
| 1.4.2 多拷贝质粒构建 | 第17-18页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第18-20页 |
| 2 原始基因与密码子优化后的β-半乳糖苷酶 | 第20-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 工具酶和试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基及使用溶液 | 第21-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 β-半乳糖苷酶表达载体的构建 | 第23-26页 |
| 2.2.2 β-半乳糖苷酶毕赤酵母工程菌的构建 | 第26页 |
| 2.2.3 β-半乳糖苷酶重组菌株的诱导表达 | 第26-27页 |
| 2.2.4 β-半乳糖苷酶酶学性质的测定 | 第27-28页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第28-34页 |
| 2.3.1 β-半乳糖苷酶表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.3.2 β-半乳糖苷酶酵母工程菌的构建 | 第29页 |
| 2.3.3 β-半乳糖苷酶酵母工程菌的诱导表达 | 第29-32页 |
| 2.3.4 β-半乳糖苷酶的酶学性质 | 第32-34页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第34-35页 |
| 3 β-半乳糖苷酶的定点突变 | 第35-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 突变菌株表达质粒p AO815-4IUG-4 及酵母重组菌的构建 | 第35页 |
| 3.2.2 pAO815-4IUG-4 毕赤酵母工程菌的诱导表达 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第36-38页 |
| 3.3.1 突变菌株表达质粒p AO815-4IUG-4 及酵母重组菌的构建 | 第36页 |
| 3.3.2 pAO815-4IUG-4 酵母重组菌的表达 | 第36-38页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第38-39页 |
| 4 基因剂量对β-半乳糖苷酶表达的影响 | 第39-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第39页 |
| 4.1.2 工具酶和试剂 | 第39页 |
| 4.1.3 实验设备 | 第39页 |
| 4.1.4 培养基及使用溶液 | 第39-40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-47页 |
| 4.2.1 Aogal-1基因二、三拷贝表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 4.2.2 多拷贝毕赤酵母重组菌株的构建与表达 | 第41-42页 |
| 4.2.3 荧光定量PCR鉴定酵母基因组中外源基因拷贝数方法的建立 | 第42-44页 |
| 4.2.4 毕赤酵母重组菌株的高密度发酵 | 第44-46页 |
| 4.2.5 高密度发酵后SDS-PAGE凝胶电泳分析及酶活的测定 | 第46-47页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第47-56页 |
| 4.3.1 Aogal-1基因二、三拷贝表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.3.2 多拷贝毕赤酵母重组菌株的构建与表达 | 第48-51页 |
| 4.3.3 荧光定量PCR鉴定酵母基因组中插入的外源基因拷贝数 | 第51-54页 |
| 4.3.4 p AO815-Aogal-2 菌株的高密度发酵 | 第54-56页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第56-57页 |
| 5 结论与展望 | 第57-59页 |
| 5.1 结论 | 第57页 |
| 5.2 创新点 | 第57-58页 |
| 5.3 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第66页 |
