| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 英文缩写 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-31页 |
| 1.阿维菌素和伊维菌素的概述 | 第13-16页 |
| 2.阿维菌素的生物学活性和安全性 | 第16页 |
| 3.组合生物学的原理及其在聚酮体合成酶改造中的应用 | 第16-21页 |
| ·聚酮体合成酶的生化反应机理 | 第17-18页 |
| ·重新构建聚酮体合成酶基因用以生物合成新的化合物 | 第18-21页 |
| 4.阿维菌素的聚酮体的生物合成 | 第21-25页 |
| 5.立题依据 | 第25-28页 |
| 6.国内外研究进展 | 第28-29页 |
| 7.目的和意义 | 第29-31页 |
| 实验材料 | 第31-37页 |
| 1.菌种和质粒 | 第31-32页 |
| 2.试剂 | 第32-33页 |
| 3.溶液 | 第33-34页 |
| 4.培养基 | 第34-36页 |
| 5.仪器 | 第36-37页 |
| 实验方法 | 第37-47页 |
| 1.链霉菌总DNA的提取 | 第37页 |
| 2.碱法小量制备质粒DNA | 第37-38页 |
| 3.DNA凝胶电泳回收 | 第38-39页 |
| 4.大肠杆菌DH-5α感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 5.热激转化和阳性克隆筛选 | 第39页 |
| 6.PCR反应 | 第39-41页 |
| 7.DNA电泳 | 第41页 |
| 8.DNA酶切和连接 | 第41页 |
| 9.重组质粒的接合转移 | 第41-42页 |
| 10.阳性克隆菌株的筛选 | 第42-43页 |
| 11.阳性克隆菌株的验证 | 第43页 |
| 12.摇瓶液体发酵产物的提取 | 第43页 |
| 13.TLC的分析 | 第43-44页 |
| 14.HPLC分析 | 第44页 |
| 15.循环诱变筛育阿维菌素高产菌株 | 第44-46页 |
| 16.均匀设计法优化发酵培养基的配方 | 第46-47页 |
| 实验结果 | 第47-73页 |
| 第一部分 阿维菌素高产菌株的选育 | 第47-54页 |
| 1.菌落形态的考察 | 第47页 |
| 2.阿维链霉菌发酵过程中培养条件的的考察 | 第47-49页 |
| ·发酵效价单位曲线的测定 | 第47-48页 |
| ·不同转种量和转种的时间对阿维链霉菌发酵的影响 | 第48-49页 |
| 3.各种诱变方法对阿维链霉菌的影响 | 第49-50页 |
| ·紫外线诱变 | 第49页 |
| ·亚硝酸诱变 | 第49-50页 |
| ·NTG诱变 | 第50页 |
| 4.利用均匀设计的方法优化阿维链霉菌的发酵培养基 | 第50-53页 |
| ·无机离子对阿维链霉菌发酵的影响 | 第50-51页 |
| ·均匀设计法优化发酵培养基的配方 | 第51-53页 |
| 5.发酵高产菌株的获得 | 第53-54页 |
| 第二部分 阿维菌素聚酮体合成酶基因的改造 | 第54-73页 |
| 1 在基因文库中筛选Milbemycin PKS modular 2中催化C_(22)-C_(23)位脱水和烯酰基还原酶基因 | 第54-56页 |
| ·ER的基因引物的设计 | 第55-56页 |
| ·PCR反应 | 第56页 |
| 2 Milbemycin PKS modular 2中DH2-ER2基因的确定 | 第56-63页 |
| ·pUC19∷3.5kb的限制性内切酶图谱的制作 | 第56-57页 |
| ·milDH2-ER2基因序列分析和同源性的比较 | 第57-60页 |
| ·DH2-ER2的功能分析 | 第60-61页 |
| ·DH2和ER2完整基因的确定 | 第61-63页 |
| 3.PCR获得含有聚酮体合成酶模块基因 | 第63-65页 |
| ·PCR扩增带有合适酶切位点的milbemycin PKS modular2中DH2-ER2的基因 | 第63页 |
| ·PCR扩增带有avermectin PKS modular2中的AT-DH-KR基因 | 第63-64页 |
| ·PCR产物的验证 | 第64-65页 |
| 4.克隆载体的构建 | 第65-71页 |
| ·带有Avermectins PKS modular 2中AT-DH-KR片段的质粒载体pAV311的构建 | 第65-66页 |
| ·带有Milbemycins PKS modular 2中DH2-ER2片段质粒载体pMIL311的构建 | 第66页 |
| ·带有阳性重组片段的质粒载体pAM311的构建 | 第66页 |
| ·接合转移质粒pHZAM311的构建 | 第66-71页 |
| 5.接合转移试验 | 第71页 |
| 6.基因重组菌株的获得 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
