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中国葡萄属野生种抗白粉病基因克隆与序列分析

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-16页
第一章 文献综述第16-42页
   ·葡萄白粉病第16-18页
     ·葡萄白粉病的起源及分布第16页
     ·葡萄属植物对白粉病的抗性第16页
     ·葡萄抗白粉病遗传第16-17页
     ·葡萄属植物抗白粉病的分子生物学研究第17-18页
   ·植物抗病的分子生物学研究第18-35页
     ·植物抗病机制第18-20页
     ·植物抗病基因的类型、结构与功能第20-26页
       ·植物抗病基因的类型第20页
       ·植物抗病基因的结构与功能第20-26页
     ·植物抗病基因克隆的方法第26-33页
       ·图位克隆法第26-27页
       ·转座子标签法第27-28页
       ·抗病基因同源序列法第28-31页
       ·mRNA差异显示第31-33页
     ·植物防卫基因第33-35页
       ·已克隆的防卫反应基因第34页
       ·防卫反应基因的结构特点第34页
       ·防卫反应基因的表达调控第34-35页
   ·本研究的目的意义第35-36页
 参考文献第36-42页
第二章 中国葡萄属野生种抗白粉病基因cDNA的克隆与序列分析第42-72页
 1 材料与方法第42-51页
   ·材料第42-44页
     ·葡萄材料第42页
     ·生化试剂第42-43页
     ·仪器第43-44页
   ·实验方法第44-51页
     ·病原菌孢子萌发实验第44页
     ·葡萄白粉病病原菌田间人工接种第44页
     ·葡萄叶片总RNA提取与纯化第44-46页
       ·葡萄总RNA的提取第44-45页
       ·总RNA的纯化和检测第45-46页
     ·cDNA第一链的合成第46页
     ·DDRT-PCR第46页
     ·6% 聚丙烯酰胺凝胶电泳第46-47页
     ·银染第47页
     ·中国葡萄属野生种抗白粉病基因差异cDNA片段的克隆与测序第47-51页
       ·中国葡萄属野生种抗白粉病基因差异cDNA片段的回收与二次PCR扩增第47页
       ·二次PCR扩增产物的回收第47-48页
       ·连接反应第48页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第48-49页
       ·连接产物的转化第49页
       ·重组质粒的筛选与鉴定第49-50页
       ·重组质粒的酶切鉴定第50页
       ·差异cDNA片段测序及序列分析第50-51页
 2 结果与分析第51-66页
   ·田间人工接种白粉病病原菌后叶片抗白粉病表现第51页
   ·葡萄总RNA提取第51页
   ·mRNA差异显示分析第51-54页
     ·适于葡萄DDRT-PCR引物组合的筛选第51-53页
     ·中国野生葡萄抗白粉病基因差异cDNA片段的获得第53-54页
   ·中国葡萄属野生种抗白粉病差异cDNA片段的克隆与测序第54-55页
     ·中国葡萄属野生种抗白粉病差异cDNA片段的克隆第54-55页
     ·中国葡萄属野生种抗白粉病差异cDNA片段的序列第55页
   ·中国葡萄属野生种抗白粉病差异cDNA片段的序列分析第55-66页
     ·抗白粉病特有差异cDNA片段的同源性分析第55-57页
     ·差异cDNA 片段T_11AC/B0319-456 同源性分析第57-59页
     ·差异cDNA T_11AC/B0320-723同源性分析第59-60页
     ·差异cDNA T_11GG/B0324-292同源性分析第60-61页
     ·差异cDNA片段T_11CG/S438-449同源性分析第61-63页
     ·差异cDNA片段T_11AC/S429-704同源性分析第63-65页
     ·差异cDNA片段T_11GG/B0322-379同源性分析第65-66页
 3 讨论第66-68页
   ·葡萄属植物抗白粉病研究第66-67页
   ·抗白粉病差异cDNA的获得及同源性分析第67-68页
 参考文献第68-72页
第三章 中国葡萄属野生种抗白粉病芪合成酶基因的克隆及序列分析第72-97页
 1 材料与方法第73-77页
   ·材料第73-74页
     ·葡萄材料第73页
     ·生化试剂第73页
     ·菌株第73-74页
   ·田间人工接种葡萄白粉病病原菌第74页
   ·葡萄总RNA的提取第74页
   ·5'RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends )与3’RACE特异引物设计第74页
   ·3'RACE第74-76页
     ·3'RACE引物第74页
     ·3'RACE cDNA第一链的合成第74-75页
     ·3'RACE-PCR反应体系及程序第75-76页
   ·5'RACE第76页
     ·5'RACE引物第76页
     ·5'RACE cDNA第一链的合成第76页
     ·5'RACE PCR反应体系与程序第76页
   ·RACE产物克隆测序及序列分析第76-77页
 2 结果与分析第77-87页
   ·5'RACE与3'RACE第77-80页
   ·葡萄芪合成酶基因cDNA全长序列及序列分析第80-87页
   ·核酸序列分析及推导的氨基酸序列分析第87页
 3 讨论第87-94页
   ·葡萄芪合成酶基因第87-92页
   ·葡萄属植物白藜芦醇的抗病性第92页
   ·芪合成酶基因工程第92-94页
 参考文献第94-97页
第四章 中国葡萄属野生种抗白粉病相关基因的克隆及序列分析第97-100页
 1 材料与方法第97-98页
   ·材料第97页
   ·田间人工接种白粉病病原菌第97页
   ·葡萄总RNA的提取第97页
   ·5'RACE第97页
   ·5'RACE片段的克隆及测序第97页
   ·核酸序列分析及推导的氨基酸性质分析第97-98页
 2 结果与分析第98-100页
   ·5'RACE第98页
   ·抗白粉病相关基因T_11AC/B0313-1708的获得及序列分析第98-100页
第五章 中国葡萄属野生种抗白粉病抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及序列分析第100-111页
 1 材料与方法第100-101页
   ·材料第100页
     ·葡萄材料第100页
     ·生化试剂第100页
     ·菌株第100页
   ·田间人工接种白粉病病原菌第100-101页
   ·葡萄总RNA的提取第101页
   ·5'RACE与3'RACE扩增cDNA片段两段序列第101页
   ·5'RACE与3'RACE cDNA 片段的克隆及测序第101页
   ·核酸序列分析及推导的氨基酸性质分析第101页
 2 结果与分析第101-107页
   ·5'RACE与3'RACE第101-103页
   ·抗坏血酸过氧化物酶基因cDNA序列全长的获得及序列分析第103页
   ·核酸序列及推导的氨基酸序列分析第103-107页
 3 讨论第107-109页
 参考文献第109-111页
第六章 中国葡萄属野生种乙醛脱氢酶基因的克隆及序列分析第111-126页
 1 材料和方法第111-113页
   ·材料第111-112页
     ·葡萄材料第111页
     ·试剂第111-112页
   ·方法第112-113页
     ·田间人工接种葡萄白粉病病原菌第112页
     ·葡萄总RNA提取及纯化第112页
     ·5'RACE与3'RACE第112-113页
     ·核酸序列分析及推导的氨基酸性质分析第113页
     ·RT-PCR第113页
 2 结果与分析第113-122页
   ·5'RACE与3'RACE第113页
   ·葡萄乙醛脱氢酶基因cDNA全长的获得第113-115页
   ·核酸序列及推导的氨基酸序列分析第115-116页
   ·中国野生葡萄VpALDH的诱导表达分析第116-122页
 3 讨论第122-124页
 参考文献第124-126页
第七章 中国葡萄属野生种抗病基因同源类似物(RGA)的克隆第126-142页
 1 材料与方法第126-132页
   ·材料第126-128页
     ·葡萄材料第126-128页
     ·生化试剂第128页
     ·仪器第128页
   ·方法第128-132页
     ·葡萄基因组DNA提取第128-129页
     ·引物的设计与合成第129-130页
     ·PCR反应体系第130页
     ·DNA特异片段的回收第130页
     ·连接反应第130页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第130-131页
     ·重组质粒的筛选与鉴定第131页
     ·重组质粒的酶切鉴定第131-132页
     ·DNA特异片段的测序及序列分析第132页
 2 结果与分析第132-135页
   ·葡萄抗病基因同源类似物(RGA)特异引物对的筛选第132-133页
   ·葡萄属植物RGA分析第133页
   ·萄萄属植物RGA的克隆、测序及核苷酸序列分析第133-135页
   ·葡萄RGA中的氨基酸保守区域第135页
 3 讨论第135-140页
   ·利用抗病基因同源序列克隆抗病基因的可行性第135-139页
   ·葡萄抗病基因RGA的序列分析第139-140页
 参考文献第140-142页
第八章 结论第142-144页
附录第144-162页
致谢第162-163页
作者简介第163页

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