中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-16页 |
第一章 文献综述 | 第16-42页 |
·葡萄白粉病 | 第16-18页 |
·葡萄白粉病的起源及分布 | 第16页 |
·葡萄属植物对白粉病的抗性 | 第16页 |
·葡萄抗白粉病遗传 | 第16-17页 |
·葡萄属植物抗白粉病的分子生物学研究 | 第17-18页 |
·植物抗病的分子生物学研究 | 第18-35页 |
·植物抗病机制 | 第18-20页 |
·植物抗病基因的类型、结构与功能 | 第20-26页 |
·植物抗病基因的类型 | 第20页 |
·植物抗病基因的结构与功能 | 第20-26页 |
·植物抗病基因克隆的方法 | 第26-33页 |
·图位克隆法 | 第26-27页 |
·转座子标签法 | 第27-28页 |
·抗病基因同源序列法 | 第28-31页 |
·mRNA差异显示 | 第31-33页 |
·植物防卫基因 | 第33-35页 |
·已克隆的防卫反应基因 | 第34页 |
·防卫反应基因的结构特点 | 第34页 |
·防卫反应基因的表达调控 | 第34-35页 |
·本研究的目的意义 | 第35-36页 |
参考文献 | 第36-42页 |
第二章 中国葡萄属野生种抗白粉病基因cDNA的克隆与序列分析 | 第42-72页 |
1 材料与方法 | 第42-51页 |
·材料 | 第42-44页 |
·葡萄材料 | 第42页 |
·生化试剂 | 第42-43页 |
·仪器 | 第43-44页 |
·实验方法 | 第44-51页 |
·病原菌孢子萌发实验 | 第44页 |
·葡萄白粉病病原菌田间人工接种 | 第44页 |
·葡萄叶片总RNA提取与纯化 | 第44-46页 |
·葡萄总RNA的提取 | 第44-45页 |
·总RNA的纯化和检测 | 第45-46页 |
·cDNA第一链的合成 | 第46页 |
·DDRT-PCR | 第46页 |
·6% 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第46-47页 |
·银染 | 第47页 |
·中国葡萄属野生种抗白粉病基因差异cDNA片段的克隆与测序 | 第47-51页 |
·中国葡萄属野生种抗白粉病基因差异cDNA片段的回收与二次PCR扩增 | 第47页 |
·二次PCR扩增产物的回收 | 第47-48页 |
·连接反应 | 第48页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第48-49页 |
·连接产物的转化 | 第49页 |
·重组质粒的筛选与鉴定 | 第49-50页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第50页 |
·差异cDNA片段测序及序列分析 | 第50-51页 |
2 结果与分析 | 第51-66页 |
·田间人工接种白粉病病原菌后叶片抗白粉病表现 | 第51页 |
·葡萄总RNA提取 | 第51页 |
·mRNA差异显示分析 | 第51-54页 |
·适于葡萄DDRT-PCR引物组合的筛选 | 第51-53页 |
·中国野生葡萄抗白粉病基因差异cDNA片段的获得 | 第53-54页 |
·中国葡萄属野生种抗白粉病差异cDNA片段的克隆与测序 | 第54-55页 |
·中国葡萄属野生种抗白粉病差异cDNA片段的克隆 | 第54-55页 |
·中国葡萄属野生种抗白粉病差异cDNA片段的序列 | 第55页 |
·中国葡萄属野生种抗白粉病差异cDNA片段的序列分析 | 第55-66页 |
·抗白粉病特有差异cDNA片段的同源性分析 | 第55-57页 |
·差异cDNA 片段T_11AC/B0319-456 同源性分析 | 第57-59页 |
·差异cDNA T_11AC/B0320-723同源性分析 | 第59-60页 |
·差异cDNA T_11GG/B0324-292同源性分析 | 第60-61页 |
·差异cDNA片段T_11CG/S438-449同源性分析 | 第61-63页 |
·差异cDNA片段T_11AC/S429-704同源性分析 | 第63-65页 |
·差异cDNA片段T_11GG/B0322-379同源性分析 | 第65-66页 |
3 讨论 | 第66-68页 |
·葡萄属植物抗白粉病研究 | 第66-67页 |
·抗白粉病差异cDNA的获得及同源性分析 | 第67-68页 |
参考文献 | 第68-72页 |
第三章 中国葡萄属野生种抗白粉病芪合成酶基因的克隆及序列分析 | 第72-97页 |
1 材料与方法 | 第73-77页 |
·材料 | 第73-74页 |
·葡萄材料 | 第73页 |
·生化试剂 | 第73页 |
·菌株 | 第73-74页 |
·田间人工接种葡萄白粉病病原菌 | 第74页 |
·葡萄总RNA的提取 | 第74页 |
·5'RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends )与3’RACE特异引物设计 | 第74页 |
·3'RACE | 第74-76页 |
·3'RACE引物 | 第74页 |
·3'RACE cDNA第一链的合成 | 第74-75页 |
·3'RACE-PCR反应体系及程序 | 第75-76页 |
·5'RACE | 第76页 |
·5'RACE引物 | 第76页 |
·5'RACE cDNA第一链的合成 | 第76页 |
·5'RACE PCR反应体系与程序 | 第76页 |
·RACE产物克隆测序及序列分析 | 第76-77页 |
2 结果与分析 | 第77-87页 |
·5'RACE与3'RACE | 第77-80页 |
·葡萄芪合成酶基因cDNA全长序列及序列分析 | 第80-87页 |
·核酸序列分析及推导的氨基酸序列分析 | 第87页 |
3 讨论 | 第87-94页 |
·葡萄芪合成酶基因 | 第87-92页 |
·葡萄属植物白藜芦醇的抗病性 | 第92页 |
·芪合成酶基因工程 | 第92-94页 |
参考文献 | 第94-97页 |
第四章 中国葡萄属野生种抗白粉病相关基因的克隆及序列分析 | 第97-100页 |
1 材料与方法 | 第97-98页 |
·材料 | 第97页 |
·田间人工接种白粉病病原菌 | 第97页 |
·葡萄总RNA的提取 | 第97页 |
·5'RACE | 第97页 |
·5'RACE片段的克隆及测序 | 第97页 |
·核酸序列分析及推导的氨基酸性质分析 | 第97-98页 |
2 结果与分析 | 第98-100页 |
·5'RACE | 第98页 |
·抗白粉病相关基因T_11AC/B0313-1708的获得及序列分析 | 第98-100页 |
第五章 中国葡萄属野生种抗白粉病抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及序列分析 | 第100-111页 |
1 材料与方法 | 第100-101页 |
·材料 | 第100页 |
·葡萄材料 | 第100页 |
·生化试剂 | 第100页 |
·菌株 | 第100页 |
·田间人工接种白粉病病原菌 | 第100-101页 |
·葡萄总RNA的提取 | 第101页 |
·5'RACE与3'RACE扩增cDNA片段两段序列 | 第101页 |
·5'RACE与3'RACE cDNA 片段的克隆及测序 | 第101页 |
·核酸序列分析及推导的氨基酸性质分析 | 第101页 |
2 结果与分析 | 第101-107页 |
·5'RACE与3'RACE | 第101-103页 |
·抗坏血酸过氧化物酶基因cDNA序列全长的获得及序列分析 | 第103页 |
·核酸序列及推导的氨基酸序列分析 | 第103-107页 |
3 讨论 | 第107-109页 |
参考文献 | 第109-111页 |
第六章 中国葡萄属野生种乙醛脱氢酶基因的克隆及序列分析 | 第111-126页 |
1 材料和方法 | 第111-113页 |
·材料 | 第111-112页 |
·葡萄材料 | 第111页 |
·试剂 | 第111-112页 |
·方法 | 第112-113页 |
·田间人工接种葡萄白粉病病原菌 | 第112页 |
·葡萄总RNA提取及纯化 | 第112页 |
·5'RACE与3'RACE | 第112-113页 |
·核酸序列分析及推导的氨基酸性质分析 | 第113页 |
·RT-PCR | 第113页 |
2 结果与分析 | 第113-122页 |
·5'RACE与3'RACE | 第113页 |
·葡萄乙醛脱氢酶基因cDNA全长的获得 | 第113-115页 |
·核酸序列及推导的氨基酸序列分析 | 第115-116页 |
·中国野生葡萄VpALDH的诱导表达分析 | 第116-122页 |
3 讨论 | 第122-124页 |
参考文献 | 第124-126页 |
第七章 中国葡萄属野生种抗病基因同源类似物(RGA)的克隆 | 第126-142页 |
1 材料与方法 | 第126-132页 |
·材料 | 第126-128页 |
·葡萄材料 | 第126-128页 |
·生化试剂 | 第128页 |
·仪器 | 第128页 |
·方法 | 第128-132页 |
·葡萄基因组DNA提取 | 第128-129页 |
·引物的设计与合成 | 第129-130页 |
·PCR反应体系 | 第130页 |
·DNA特异片段的回收 | 第130页 |
·连接反应 | 第130页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第130-131页 |
·重组质粒的筛选与鉴定 | 第131页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第131-132页 |
·DNA特异片段的测序及序列分析 | 第132页 |
2 结果与分析 | 第132-135页 |
·葡萄抗病基因同源类似物(RGA)特异引物对的筛选 | 第132-133页 |
·葡萄属植物RGA分析 | 第133页 |
·萄萄属植物RGA的克隆、测序及核苷酸序列分析 | 第133-135页 |
·葡萄RGA中的氨基酸保守区域 | 第135页 |
3 讨论 | 第135-140页 |
·利用抗病基因同源序列克隆抗病基因的可行性 | 第135-139页 |
·葡萄抗病基因RGA的序列分析 | 第139-140页 |
参考文献 | 第140-142页 |
第八章 结论 | 第142-144页 |
附录 | 第144-162页 |
致谢 | 第162-163页 |
作者简介 | 第163页 |