缩略词表 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-13页 |
1 前言 | 第13-25页 |
·顺式作用元件 | 第13-15页 |
·GCC box | 第14页 |
·DRE/CRT | 第14-15页 |
·转录因子 | 第15-17页 |
·转录因子的结构与功能 | 第16-17页 |
·ERF转录因子 | 第17-24页 |
·ERF蛋白的结构特征及其功能特性 | 第18-21页 |
·ERF转录因子在植物胁迫应答中的作用 | 第21-24页 |
·实验的目的和意义 | 第24-25页 |
2 材料与方法 | 第25-45页 |
·植物材料 | 第25页 |
·菌株与质粒 | 第25页 |
·酶与试剂 | 第25页 |
·主要仪器 | 第25-26页 |
·表达载体pLexA-JERFs的构建 | 第26-30页 |
·引物设计 | 第26页 |
·JERFs的ORF的PCR扩增 | 第26-27页 |
·PCR产物的纯化 | 第27页 |
·酶切(20μl体系) | 第27页 |
·酶切产物纯化(鼎国DNA纯化试剂盒) | 第27-28页 |
·连接(20μl体系) | 第28页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第28页 |
·大肠杆菌热击转化 | 第28-29页 |
·菌液PCR鉴定 | 第29页 |
·提取大肠杆菌质粒 | 第29-30页 |
·质粒酶切鉴定(20μl体系) | 第30页 |
·JERFs转录激活特性的酵母瞬间表达定性分析 | 第30-33页 |
·酵母培养基配置 | 第30-31页 |
·酵母电转化感受态细胞的制备 | 第31页 |
·酵母电转化 | 第31-32页 |
·β-半乳糖苷酶滤纸印迹分析 | 第32-33页 |
·番茄序列已知的含GCC-box基因片段的PCR克隆 | 第33-37页 |
·引物设计 | 第33页 |
·番茄gDNA提取 | 第33-34页 |
·基因片段的PCR扩增 | 第34-35页 |
·PCR产物纯化(鼎国DNA纯化试剂盒),参照2.5.5 | 第35页 |
·连接(10μl体系) | 第35页 |
·大肠杆菌感受态的制备(电击转化) | 第35-36页 |
·大肠杆菌电击转化 | 第36页 |
·菌液PCR鉴定 | 第36-37页 |
·PCR产物酶切鉴定(20μl体系,酶切4h) | 第37页 |
·番茄Northern杂交分析 | 第37-43页 |
·番茄种植 | 第37页 |
·番茄苗的处理 | 第37-38页 |
·总RNA的提取 | 第38-39页 |
·甲醛凝胶电泳 | 第39-40页 |
·真空转膜与紫外交联 | 第40页 |
·Northern杂交 | 第40-43页 |
·烟草序列已知的含GCC-box基因片段的PCR克隆 | 第43-44页 |
·引物设计 | 第43页 |
·烟草gDNA的提取、PCR扩增、PCR产物的纯化、连接、转化、菌液PCR鉴定。参照2.7 | 第43-44页 |
·PCR产物酶切鉴定(20μl体系,酶切4h) | 第44页 |
·转基因烟草的Northern Blot分析 | 第44-45页 |
3 结果与分析 | 第45-56页 |
·JERFs转录激活特性酵母瞬间表达分析 | 第45-47页 |
·pLexA-JERFs表达载体的构建 | 第45-46页 |
·β-半乳糖甘酶活性滤纸印迹分析 | 第46-47页 |
·JERFs的诱导表达特性分析 | 第47-53页 |
·番茄序列己知、其启动子中含GCC-box的基因片段的PCR克隆 | 第47-48页 |
·乙烯对番茄JERFs基因和含GCC-box的基因转录表达的影响 | 第48-50页 |
·SA对番茄JERFs基因和含GCC-box的基因转录表达的影响 | 第50-51页 |
·MeJA对番茄JERFs基因转录表达的影响 | 第51页 |
·ABA对番茄JERFs基因转录表达的影响 | 第51页 |
·NaCl对番茄JERFs基因转录表达的影响 | 第51-52页 |
·低温对番茄JERFs基因转录表达的影响 | 第52-53页 |
·JERFs的转基因烟草分析 | 第53-56页 |
·烟草序列已知、其启动子中含GCC-box的基因片段的PCR克隆 | 第53-55页 |
·JERF2在烟草中超表达能够激活含GCC-box的基因的表达 | 第55-56页 |
4 讨论 | 第56-60页 |
·JERFs是转录激活因子 | 第56-57页 |
·JERFs参与GCC-box介导的基因表达调控 | 第57-59页 |
·下一步工作设想 | 第59-60页 |
结论 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-67页 |
致谢 | 第67页 |