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番茄JERFs基因在GCC-Box介导的基因表达调控中的作用

缩略词表第1-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-13页
1 前言第13-25页
   ·顺式作用元件第13-15页
     ·GCC box第14页
     ·DRE/CRT第14-15页
   ·转录因子第15-17页
     ·转录因子的结构与功能第16-17页
   ·ERF转录因子第17-24页
     ·ERF蛋白的结构特征及其功能特性第18-21页
     ·ERF转录因子在植物胁迫应答中的作用第21-24页
   ·实验的目的和意义第24-25页
2 材料与方法第25-45页
   ·植物材料第25页
   ·菌株与质粒第25页
   ·酶与试剂第25页
   ·主要仪器第25-26页
   ·表达载体pLexA-JERFs的构建第26-30页
     ·引物设计第26页
     ·JERFs的ORF的PCR扩增第26-27页
     ·PCR产物的纯化第27页
     ·酶切(20μl体系)第27页
     ·酶切产物纯化(鼎国DNA纯化试剂盒)第27-28页
     ·连接(20μl体系)第28页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法)第28页
     ·大肠杆菌热击转化第28-29页
     ·菌液PCR鉴定第29页
     ·提取大肠杆菌质粒第29-30页
     ·质粒酶切鉴定(20μl体系)第30页
   ·JERFs转录激活特性的酵母瞬间表达定性分析第30-33页
     ·酵母培养基配置第30-31页
     ·酵母电转化感受态细胞的制备第31页
     ·酵母电转化第31-32页
     ·β-半乳糖苷酶滤纸印迹分析第32-33页
   ·番茄序列已知的含GCC-box基因片段的PCR克隆第33-37页
     ·引物设计第33页
     ·番茄gDNA提取第33-34页
     ·基因片段的PCR扩增第34-35页
     ·PCR产物纯化(鼎国DNA纯化试剂盒),参照2.5.5第35页
     ·连接(10μl体系)第35页
     ·大肠杆菌感受态的制备(电击转化)第35-36页
     ·大肠杆菌电击转化第36页
     ·菌液PCR鉴定第36-37页
     ·PCR产物酶切鉴定(20μl体系,酶切4h)第37页
   ·番茄Northern杂交分析第37-43页
     ·番茄种植第37页
     ·番茄苗的处理第37-38页
     ·总RNA的提取第38-39页
     ·甲醛凝胶电泳第39-40页
     ·真空转膜与紫外交联第40页
     ·Northern杂交第40-43页
   ·烟草序列已知的含GCC-box基因片段的PCR克隆第43-44页
     ·引物设计第43页
     ·烟草gDNA的提取、PCR扩增、PCR产物的纯化、连接、转化、菌液PCR鉴定。参照2.7第43-44页
     ·PCR产物酶切鉴定(20μl体系,酶切4h)第44页
   ·转基因烟草的Northern Blot分析第44-45页
3 结果与分析第45-56页
   ·JERFs转录激活特性酵母瞬间表达分析第45-47页
     ·pLexA-JERFs表达载体的构建第45-46页
     ·β-半乳糖甘酶活性滤纸印迹分析第46-47页
   ·JERFs的诱导表达特性分析第47-53页
     ·番茄序列己知、其启动子中含GCC-box的基因片段的PCR克隆第47-48页
     ·乙烯对番茄JERFs基因和含GCC-box的基因转录表达的影响第48-50页
     ·SA对番茄JERFs基因和含GCC-box的基因转录表达的影响第50-51页
     ·MeJA对番茄JERFs基因转录表达的影响第51页
     ·ABA对番茄JERFs基因转录表达的影响第51页
     ·NaCl对番茄JERFs基因转录表达的影响第51-52页
     ·低温对番茄JERFs基因转录表达的影响第52-53页
   ·JERFs的转基因烟草分析第53-56页
     ·烟草序列已知、其启动子中含GCC-box的基因片段的PCR克隆第53-55页
     ·JERF2在烟草中超表达能够激活含GCC-box的基因的表达第55-56页
4 讨论第56-60页
   ·JERFs是转录激活因子第56-57页
   ·JERFs参与GCC-box介导的基因表达调控第57-59页
   ·下一步工作设想第59-60页
结论第60-61页
参考文献第61-67页
致谢第67页

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