| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| ·膜蛋白 | 第14-20页 |
| ·生物膜与膜蛋白 | 第14-15页 |
| ·膜蛋白的研究意义 | 第15-16页 |
| ·膜蛋白研究现状 | 第16-17页 |
| ·膜蛋白高效表达策略 | 第17-20页 |
| ·表达宿主的筛选 | 第18页 |
| ·弱启动子替代强启动子 | 第18页 |
| ·包涵体表达策略 | 第18-19页 |
| ·融合表达策略 | 第19页 |
| ·无细胞表达策略 | 第19-20页 |
| ·表达条件的优化 | 第20页 |
| ·水通道蛋白 | 第20-24页 |
| ·水通道蛋白简介 | 第21页 |
| ·大肠杆菌水通道蛋白AqpZ | 第21-22页 |
| ·AqpZ的稳定性 | 第22-23页 |
| ·水通道蛋白研究意义 | 第23-24页 |
| ·水通道蛋白高效表达研究进展 | 第24页 |
| ·MBP/polyhistidine元亲和标签体系 | 第24-25页 |
| ·本课题拟研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 AqpZ元亲和标签表达载体的构建 | 第26-37页 |
| ·引言 | 第26-27页 |
| ·实验材料及仪器 | 第27-28页 |
| ·菌种 | 第27页 |
| ·质粒 | 第27页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第27页 |
| ·分子量标准 | 第27页 |
| ·缓冲液及其他常用溶液 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·主要仪器及设备 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·分子生物学相关操作 | 第28-30页 |
| ·分子克隆相关实验 | 第28页 |
| ·大肠杆菌质粒的抽提 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第29页 |
| ·质粒或连接产物的转化 | 第29-30页 |
| ·AqpZ二元亲和标签表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·AqpZ基因的扩增 | 第31页 |
| ·AqpZ二元亲和标签表达载体的构建 | 第31页 |
| ·融合蛋白MBP-AqpZ-HIS的表达 | 第31-32页 |
| ·工程菌的培养及融合蛋白的表达 | 第31-32页 |
| ·细菌的裂解 | 第32页 |
| ·分析测定方法 | 第32-33页 |
| ·细胞密度的测定 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE电泳及蛋白浓度分析 | 第32-33页 |
| ·实验结果 | 第33-35页 |
| ·AqpZ编码基因的克隆 | 第33页 |
| ·AqpZ二元亲和标签表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白MBP-AqpZ-HIS的表达 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 融合蛋白MBP-AqpZ-HIS的表达优化 | 第37-46页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·实验材料及仪器 | 第37-38页 |
| ·菌种 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·缓冲液及其他常用溶液 | 第38页 |
| ·分子量标准 | 第38页 |
| ·主要仪器及设备 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-39页 |
| ·表达条件的优化 | 第38-39页 |
| ·细菌的裂解 | 第39页 |
| ·分析测定方法 | 第39页 |
| ·细胞密度的测定 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE电泳及蛋白浓度分析 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-44页 |
| ·不同表达宿主对MBP-AqpZ-HIS融合蛋白表达的影响 | 第39-40页 |
| ·不同诱导时机对MBP-AqpZ-HIS融合蛋白表达的影响 | 第40-42页 |
| ·不同IPTG浓度对MBP-AqpZ-HIS融合蛋白表达的影响 | 第42-44页 |
| ·不同诱导后培养时间对MBP-AqpZ-HIS融合蛋白表达的影响 | 第44页 |
| ·优化结果 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 水通道蛋白AqpZ-HIS的分离纯化 | 第46-59页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料及仪器 | 第46-48页 |
| ·菌种 | 第46-47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·特异性蛋白酶 | 第47页 |
| ·缓冲液及其他常用溶液 | 第47-48页 |
| ·分子量标准 | 第48页 |
| ·主要仪器及设备 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·细胞膜的分离和去污剂的筛选 | 第48-49页 |
| ·融合蛋白MBP-AqpZ-HIS的分离纯化 | 第49页 |
| ·蛋白酶抑制剂的去除 | 第49页 |
| ·蛋白的特异性酶切 | 第49页 |
| ·水通道蛋白的分离纯化 | 第49页 |
| ·分析测定方法 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE电泳及蛋白浓度分析 | 第49-50页 |
| ·实验结果 | 第50-57页 |
| ·细胞膜的分离和去污剂的筛选 | 第50-51页 |
| ·AqpZ-HIS的分离纯化 | 第51-57页 |
| ·AqpZ-HIS的分离纯化—基于策略Ⅰ | 第52-55页 |
| ·AqpZ-HIS的分离纯化—基于策略Ⅱ | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 AqpZ的结构及结构稳定性的研究 | 第59-65页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验材料及仪器 | 第59-60页 |
| ·蛋白样品 | 第59页 |
| ·缓冲液及其他常用溶液 | 第59页 |
| ·分子量标准 | 第59页 |
| ·主要仪器及设备 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·色氨酸荧光光谱 | 第60页 |
| ·AqpZ四级结构的研究 | 第60页 |
| ·AqpZ结构稳定性研究 | 第60-61页 |
| ·实验结果 | 第61-63页 |
| ·水通道蛋白AqpZ三级结构 | 第61-62页 |
| ·水通道蛋白AqpZ四级结构 | 第62页 |
| ·水通道蛋白结构稳定性 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 结论、创新点及展望 | 第65-67页 |
| ·结论 | 第65-66页 |
| ·课题创新点 | 第66页 |
| ·课题展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
