| 致谢 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-31页 |
| Ⅰ 植物抗病毒基因工程研究进展 | 第10-21页 |
| 1 、 现有的抗病毒基因工程策略及其评价 | 第10-19页 |
| ·利用植物自身编码的抗病毒基因策略 | 第10-12页 |
| ·PAP基因策略 | 第11页 |
| ·N基因策略 | 第11页 |
| ·PR蛋白基因策略 | 第11-12页 |
| ·利用来自病毒编码的抗病毒基因工程策略 | 第12-18页 |
| ·外壳蛋白(Coat protein,CP)基因策略 | 第12-13页 |
| ·卫星RNA基因策略 | 第13-14页 |
| ·病毒反义RNA策略 | 第14页 |
| ·复制酶基因策略 | 第14-15页 |
| ·运动蛋白基因策略 | 第15-17页 |
| ·核酶策略(Ribozyme) | 第17-18页 |
| ·弱毒株全长cDNA介导的抗性 | 第18页 |
| ·其它基因介导的抗性研究 | 第18-19页 |
| ·病毒复制干扰型分子 | 第18页 |
| ·2′-5′寡腺苷酸合成酶基因(2-5A合成酶) | 第18-19页 |
| ·植物抗体(plantibody)基因 | 第19页 |
| 2 、 提高转基因工程抗病性的新策略 | 第19-20页 |
| ·多种抗性基因控制一种病毒 | 第19-20页 |
| ·多种抗性基因控制病毒混合感染 | 第20页 |
| ·分离新的抗病毒基因 | 第20页 |
| 3 、 结语 | 第20-21页 |
| Ⅱ 烟草花叶病毒的分子生物学 | 第21-30页 |
| 1 、 TMV的基因组结构 | 第21-25页 |
| 2 、 TMV基因的功能 | 第25-27页 |
| ·外壳蛋白基因 | 第25-26页 |
| ·移动蛋白基因 | 第26页 |
| ·126KDa／183KDa蛋白基因 | 第26-27页 |
| 3 、 TMV作为基因表达载体的研究 | 第27-30页 |
| Ⅲ 论文研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二部分 TMV地黄分离物MP基因的克隆及序列分析 | 第31-43页 |
| 1 材料和方法 | 第31-37页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·供试毒源 | 第31页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·酶和试剂 | 第31页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-37页 |
| ·基本分子生物学方法 | 第32-34页 |
| ·质粒的小量提取 | 第32页 |
| ·质粒的大量提纯 | 第32-33页 |
| ·质粒的酶切和连接方法 | 第33页 |
| ·DNA片段的回收纯化 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第34页 |
| ·重组质粒的单菌落直接快速鉴定法(Cracking) | 第34页 |
| ·烟草花叶病毒RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR | 第35页 |
| ·PCR产物的克隆和序列测定 | 第35-36页 |
| ·TMV全长及缺失型MP基因的PCR扩增 | 第36页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第36页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-41页 |
| ·TMV MP基因的RT-PCR扩增 | 第37页 |
| ·重组质粒酶切、PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·TMV MP基因的序列分析 | 第38-39页 |
| ·全长及缺失型TMV MP基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·全长及缺失型TMV MP基因原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第41页 |
| 3 小结 | 第41-43页 |
| 第三部分 TMV地黄分离物全长及缺失型MP基因植物表达载体的构建及对番茄的转化 | 第43-53页 |
| Ⅰ 番茄子叶再生系统的初步研究 | 第43-47页 |
| 1 材料与方法 | 第43-44页 |
| ·试验材料 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-44页 |
| ·番茄种子表面消毒和无菌苗的培养 | 第43页 |
| ·外植体的制备 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·卡那霉素抑菌浓度的确定 | 第43-44页 |
| ·头胞菌素对番茄子叶分化的影响 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-46页 |
| ·不同消毒时间对番茄种子萌发的影响 | 第44页 |
| ·分化培养基的筛选 | 第44-45页 |
| ·不同浓度卡那霉素对番茄子叶分化的影响 | 第45页 |
| ·不同浓度头孢菌素对番茄子叶分化的影响 | 第45-46页 |
| 3 小结 | 第46-47页 |
| Ⅱ TMV地黄分离物全长及缺失型MP基因植物表达载体的构建及对番茄的遗传转化 | 第47-53页 |
| 1 材料与方法 | 第47-48页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·质粒 | 第47页 |
| ·酶及试剂 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-48页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第47页 |
| ·植物表达载体向农杆菌的转化 | 第47-48页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| ·农杆菌的转化 | 第48页 |
| ·外源基因对番茄的转化 | 第48页 |
| ·菌液的准备 | 第48页 |
| ·外源基因对番茄的转化 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-52页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第48-51页 |
| ·植物表达载体向农杆菌的转化及转化子的鉴定 | 第51-52页 |
| ·外源基因转化番茄 | 第52页 |
| 3 小结 | 第52-53页 |
| 第四部分 结论与讨论 | 第53-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
