英文缩略表 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-8页 |
1. 引言 | 第8-14页 |
1.1 活性氧的产生途径 | 第8-9页 |
1.2 活性氧的作用及其氧化损伤 | 第9-10页 |
1.3 活性氧的酶促清除系统 | 第10-12页 |
1.4 有关抗氧化酶系统的植物基因工程 | 第12-14页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第14页 |
2. 材料与方法 | 第14-28页 |
2.1 实验材料 | 第14-15页 |
2.1.1 植物材料 | 第14页 |
2.1.2 菌株与质粒 | 第14页 |
2.1.3 酶与生化试剂 | 第14-15页 |
2.1.4 PCR引物 | 第15页 |
2.2 实验方法 | 第15-28页 |
2.2.1 总RNA的提取 | 第15-16页 |
2.2.2 反转录 | 第16-17页 |
2.2.3 小麦叶绿体Cu/Zn-SOD基因的分离 | 第17-21页 |
2.2.3.1 目的基因3’端片段的扩增 | 第17-18页 |
2.2.3.2 连接反应 | 第18页 |
2.2.3.3 感受态细胞的制备 | 第18页 |
2.2.3.4 转化 | 第18-19页 |
2.2.3.5 碱法小量提取质粒DNA | 第19-20页 |
2.2.3.6 酶切鉴定 | 第20页 |
2.2.3.7 序列测定 | 第20页 |
2.2.3.8 叶绿体Cu/Zn-SOD基因全长的分离 | 第20-21页 |
2.2.4 正、反义SOD基因表达载体的构建 | 第21页 |
2.2.5 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备、转化 | 第21-22页 |
2.2.5.1 感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
2.2.5.2 冻融法转化农杆菌 | 第22页 |
2.2.6 农杆菌介导转化烟草 | 第22-23页 |
2.2.7 转基因烟草的分子鉴定 | 第23-25页 |
2.2.7.1 烟草基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
2.2.7.2 转基因植株的PCR鉴定 | 第24页 |
2.2.7.3 PCR-Southern分析 | 第24-25页 |
2.2.8 小麦类囊体结合型APX基因片段的克隆 | 第25-26页 |
2.2.9 APX基因5’端的克隆 | 第26-27页 |
2.2.10 APX基因3’端的克隆 | 第27-28页 |
3. 结果与分析 | 第28-40页 |
3.1 叶绿体Cu/Zn-SOD基因3’端的克隆 | 第28-29页 |
3.2 叶绿体Cu/Zn-SOD基因全长的的克隆 | 第29-32页 |
3.3 正、反义SOD基因表达载体的构建 | 第32-34页 |
3.4 转基因植株的分子检测 | 第34-35页 |
3.5 小麦类囊体结合型APX基因片段的克隆 | 第35-36页 |
3.6 APX基因5’端的克隆 | 第36-37页 |
3.7 APX基因3’端的克隆 | 第37-40页 |
4. 讨论 | 第40-43页 |
参考文献 | 第43-48页 |
英文摘要 | 第48-49页 |
附图 | 第49-50页 |