多基因植物表达载体构建方法的研究
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-34页 |
| ·植物多基因聚合技术的研究进展 | 第12-17页 |
| ·多基因聚合的方法 | 第13-17页 |
| ·杂交法 | 第13页 |
| ·多个表达载体多次转化法 | 第13-14页 |
| ·多个表达载体的共转化法 | 第14-15页 |
| ·多基因单表达载体一次性转化法 | 第15-17页 |
| ·独立表达盒法构建多基因表达载体的研究进展 | 第17-26页 |
| ·借助稀有归巢内切酶的方法 | 第17-19页 |
| ·利用Cre/LoxP重组系统的方法 | 第19-23页 |
| ·基于Gateway技术的方法 | 第23-26页 |
| ·超长链多不饱和脂肪酸研究进展 | 第26-32页 |
| ·超长链多不饱和脂肪酸的重要意义 | 第26-27页 |
| ·超长链多不饱和脂肪酸的来源 | 第27页 |
| ·超长链多不饱和脂肪酸的生物合成途径 | 第27-31页 |
| ·超长链多不饱和脂肪酸在转基因植物中的合成 | 第31-32页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第32-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-50页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·菌株与质粒 | 第34页 |
| ·PCR引物 | 第34-35页 |
| ·酶及生化试剂 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-50页 |
| ·基因组DNA提取 | 第35-38页 |
| ·植物RNA的提取 | 第38-40页 |
| ·RNA甲醛变性胶电泳检测 | 第40页 |
| ·反转录cDNA第一链的合成 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增各目的基因 | 第41页 |
| ·连接反应 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第42-43页 |
| ·单菌落PCR的检测 | 第43页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第43-44页 |
| ·质粒DNA的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·去磷酸化 | 第44页 |
| ·DNA片段的回收 | 第44-45页 |
| ·序列测定 | 第45页 |
| ·农杆菌感受态的制备及转化 | 第45-47页 |
| ·根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·根癌农杆菌GV3101电转化感受态制备 | 第46页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第46-47页 |
| ·电击法转化农杆菌 | 第47页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第47-48页 |
| ·转基因植株分析 | 第48-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-72页 |
| ·供给载体的构建 | 第50-55页 |
| ·目的基因亚克隆入供给载体 | 第55-62页 |
| ·Δ9Elo的亚克隆 | 第55-56页 |
| ·Δ8Des的亚克隆 | 第56-57页 |
| ·Δ5Des的亚克隆 | 第57-58页 |
| ·Δ15Des的亚克隆 | 第58-59页 |
| ·GUS的亚克隆 | 第59-60页 |
| ·GFP的亚克隆 | 第60-61页 |
| ·BAR的亚克隆 | 第61-62页 |
| ·多基因表达盒的组装 | 第62-71页 |
| ·EPA合成表达载体的组装 | 第62-68页 |
| ·过渡载体pCRΔ9Δ8Δ5Δ15的组装 | 第62-66页 |
| ·EPA 表达载体的构建 | 第66-68页 |
| ·报告基因表达载体的组装 | 第68-71页 |
| ·过渡载体pCRGUSGFPBAR 的组装 | 第68-69页 |
| ·表达载体pCambia3EC 的构建 | 第69-71页 |
| ·转基因拟南芥的获得 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-78页 |
| ·杂交法 | 第72页 |
| ·分次转化法 | 第72-73页 |
| ·共转化法 | 第73页 |
| ·多基因单表达载体一次性转化法 | 第73页 |
| ·本方法的特色及创新之处 | 第73-76页 |
| ·展望 | 第76-78页 |
| 5 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 附录 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
