| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 英文缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 细胞色素P450酶的研究进展 | 第11-19页 |
| ·CYP450酶的命名与分布 | 第11页 |
| ·CYP450酶的结构与性质 | 第11-14页 |
| ·CYP450酶的结构一致性 | 第11-12页 |
| ·P450酶系的组成 | 第12页 |
| ·P450酶系反应的分子机制 | 第12-13页 |
| ·P450酶的多态性 | 第13-14页 |
| ·CYP450酶与药物代谢 | 第14-16页 |
| ·CYP450在药物代谢中的作用 | 第14-15页 |
| ·CYP450与药物相互作用的关系 | 第15-16页 |
| ·CYP450研究技术的进展 | 第16-19页 |
| ·CYP用于代谢药物的体外研究方法 | 第16-18页 |
| ·基于CYP的药物代谢体外检测方法研究进展 | 第18-19页 |
| 2 CYP2D6的概述 | 第19-24页 |
| ·、CYP2D6的基因序列与结构 | 第19页 |
| ·CYP2D6的基因多态性 | 第19-20页 |
| ·CYP2D6与药物代谢 | 第20-24页 |
| ·CYP2D6代谢的药物 | 第20-21页 |
| ·CYP2D6的基因多态性与代谢表型 | 第21-22页 |
| ·CYP2D6与药物相互作用 | 第22页 |
| ·展望 | 第22-23页 |
| ·本研究的立题依据与思路 | 第23-24页 |
| 第二章 CYP2D6基因的克隆与表达 | 第24-40页 |
| 1 材料与仪器 | 第24-29页 |
| ·CYP2D6 WT的基因序列 | 第24-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第25-26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·主要溶液 | 第26-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-34页 |
| ·PCR引物的设计 | 第29页 |
| ·CYP2D6-WT和各SNP表达载体的构建与鉴定 | 第29-32页 |
| ·酵母重组表达菌株的获得 | 第32页 |
| ·目的蛋白的表达和鉴定 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-38页 |
| ·CYP2D6-WT和各SNP表达载体的构建与鉴定 | 第34-36页 |
| ·目的蛋白的表达和鉴定 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| ·表达系统的选择 | 第38-39页 |
| ·表达产物的分析 | 第39-40页 |
| 第三章 CYP2D6酶活性的检测 | 第40-50页 |
| 1、材料与仪器 | 第40-41页 |
| ·2D6酶蛋白微粒体 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要溶液 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| 2、实验方法 | 第41-42页 |
| ·重组酶对探针底物丁夫洛尔1'-羟基化活性的检测 | 第41-42页 |
| ·重组酶对荧光底物AMMC去甲基化活性的检测 | 第42页 |
| 3、结果与分析 | 第42-48页 |
| ·CYP2D6酶与阴性对照的比较 | 第42-43页 |
| ·P450氧化还原酶(POR)对2D6活性的影响 | 第43页 |
| ·重组酶对探针底物丁夫洛尔1'-羟基化活性的检测 | 第43-46页 |
| ·重组酶对荧光底物AMMC去甲基化活性的检测 | 第46-48页 |
| 4、讨论 | 第48-50页 |
| ·酵母内源P450酶系统对重组2D6酶活性的影响 | 第48-49页 |
| ·CYP2D6 WT活性分析 | 第49页 |
| ·2D6多态性对酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 第四章 药物筛选 | 第50-59页 |
| 1 材料与方法 | 第51-53页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·基于探针底物丁夫洛尔的药物抑制筛选 | 第51页 |
| ·基于荧光底物AMMC的高通量药物抑制筛选 | 第51-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-56页 |
| ·基于两种底物的药物筛选结果的对照 | 第53-55页 |
| ·特异性抑制剂奎尼T对CYPZD6-WT和各SNP酶的抑制 | 第55-56页 |
| ·不同酶对不同药交叉筛选的IC50值 | 第56页 |
| 3 讨论 | 第56-59页 |
| ·基于探针底物和荧光底物药筛的比较 | 第57页 |
| ·药物与药物的相互作用与CYP2D6的关系 | 第57-58页 |
| ·2D6的多态性对药物与药物相互作用的影响 | 第58-59页 |
| 全文小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
