| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第8-11页 |
| 第一部分 材料与方法 | 第11-22页 |
| 1 材料及来源 | 第11-12页 |
| ·菌株和质粒 | 第11页 |
| ·主要试剂 | 第11-12页 |
| ·细胞培养和转染 | 第12页 |
| 2 实验方法 | 第12-22页 |
| ·pBabe-CUEDC2稳定载体的构建及鉴定 | 第12-15页 |
| ·酶切Flag-CUEDC2质粒和pBabe载体 | 第13页 |
| ·连接Flag-CUEDC2质粒和pBabe载体 | 第13页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第13-14页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第14页 |
| ·质粒提取、克隆酶切鉴定 | 第14-15页 |
| ·荧光素酶活性实验 | 第15页 |
| ·GST沉淀实验(GST pulldown) | 第15-17页 |
| ·免疫共沉淀(Co-IP) | 第17-18页 |
| ·共定位实验 | 第18页 |
| ·RNA干涉实验 | 第18-21页 |
| ·体外转录制备siRNA | 第18-20页 |
| ·稳定干涉细胞系建立 | 第20-21页 |
| ·降解实验 | 第21-22页 |
| 第二部分 结果 | 第22-38页 |
| 1、克隆构建结果 | 第22页 |
| ·pBabe-CUEDC2表达载体菌液PCR鉴定 | 第22页 |
| ·pBabe-CUEDC2表达载体酶切鉴定 | 第22页 |
| 2、CUEDC2与ER相互作用研究 | 第22-27页 |
| ·CUEDC2与ER相互作用的验证 | 第22-26页 |
| ·Co-IP实验检测CUEDC2与ERα存在相互作用 | 第22-24页 |
| ·GST pulldown实验检测CUEDC2与ERα和ERβ存在相互作用 | 第24-26页 |
| ·CUEDC2能够与ERα共定位 | 第26-27页 |
| ·ERα和CUEDC2在细胞质发生共定位 | 第26-27页 |
| 3.CUEDC2抑制ERα的转录激活活性 | 第27-30页 |
| ·自制活性炭处理胎牛血清与进口活性炭处理血清的效果对比 | 第27-28页 |
| ·CUEDC2能够抑制ERα的转录激活活性 | 第28-29页 |
| ·CUEDC2能够抑制ERβ的转录激活活性 | 第29页 |
| ·干涉CUEDC2表达能够上调ERα的转录激活活性 | 第29-30页 |
| 4、CUEDC2能够下调ERα的蛋白质水平 | 第30-37页 |
| ·CUEDC2能够负调控ERα的蛋白表达水平 | 第30-31页 |
| ·CUEDC2不影响ERβ的蛋白表达水平 | 第31-32页 |
| ·建立稳定干涉CUEDC2的乳腺癌细胞系 | 第32-35页 |
| ·ZR-75-1细胞中CUEDC2干涉后能够上调ERα蛋白质水平 | 第32-34页 |
| ·MCF-7细胞中CUEDC2干涉后能够上调ERα蛋白质水平 | 第34页 |
| ·MB-MDA-435细胞中CUEDC2干涉单克隆鉴定 | 第34-35页 |
| ·MB-MDA-231细胞中CUEDC2干涉单克隆鉴定 | 第35页 |
| ·干涉CUEDC2有效废除了雌激素对ERα的降解作用 | 第35-36页 |
| ·干涉细胞中转染过量CUEDC2能够恢复其对ERα的降解作用 | 第36-37页 |
| 5、CUEDC2在小鼠各个组织中的表达情况 | 第37-38页 |
| 第三部分 讨论 | 第38-40页 |
| 总结 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 英文缩略词 | 第44-46页 |
| CUEDC2与雌激素受体ERβ相互作用并抑制其转录活性 | 第46-54页 |
| 个人简历 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
