| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1 果实成熟软化过程中细胞壁结构的变化 | 第14页 |
| 2 果实成熟软化过程中细胞壁成分的变化 | 第14-16页 |
| ·半乳糖和阿拉伯糖的变化 | 第14-15页 |
| ·纤维素的变化 | 第15页 |
| ·半纤维素的变化 | 第15-16页 |
| 3 果实成熟软化相关基因研究进展 | 第16-19页 |
| ·β-半乳糖苷酶(β-galactosidase) | 第16页 |
| ·β-甘露聚糖酶(β-mannanase) | 第16-17页 |
| ·α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-arabinofuranosidase) | 第17-18页 |
| ·扩展蛋白(Expansins) | 第18-19页 |
| 4 RACE技术研究进展 | 第19-22页 |
| ·RACE技术的原理 | 第19-20页 |
| ·RACE技术的步骤优化 | 第20页 |
| ·反转录效率的提高 | 第20页 |
| ·加尾反应 | 第20页 |
| ·简并引物的使用 | 第20页 |
| ·几种改良的PCR技术 | 第20-21页 |
| ·锚连接RACE | 第20-21页 |
| ·RNA连接酶介导的RACE | 第21页 |
| ·SMART RACE技术 | 第21页 |
| ·RACE技术的应用前景 | 第21-22页 |
| 第二章 中国李果肉组织总RNA的提取 | 第22-28页 |
| 摘要 | 第22页 |
| 1 材料与方法 | 第22-24页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第22页 |
| ·提取方法与步骤 | 第22-23页 |
| ·总RNA提取方法 | 第22-23页 |
| ·基因组DNA的消化 | 第23页 |
| ·RNA检测与RT-PCR分析 | 第23-24页 |
| ·RNA检测方法 | 第23页 |
| ·RNA纯度和产率的检测 | 第23页 |
| ·RT-PCR分析 | 第23-24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-26页 |
| ·提取RNA的电泳分析 | 第24页 |
| ·洗液中山梨醇浓度对总RNA产率的影响 | 第24-26页 |
| ·RT-RCR分析 | 第26页 |
| 3 讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 中国李果实软化相关基因的克隆 | 第28-56页 |
| 摘要 | 第28页 |
| 1.实验材料 | 第28页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·化学试剂、酶制剂及试剂盒 | 第28页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| 2.方法 | 第28-34页 |
| ·总RNA提取的方法 | 第28页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第28-29页 |
| ·中国李果实软化相关基因的克隆 | 第29-34页 |
| ·引物的设计 | 第29-30页 |
| ·基因保守区的克隆 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的回收、连接、转化及测序 | 第31-32页 |
| ·3'RACE扩增 | 第32-33页 |
| ·5'RACE的扩增 | 第33-34页 |
| 3. 结果与分析 | 第34-54页 |
| ·保守片段的结果分析 | 第34-35页 |
| ·3'RACE扩增 | 第35-36页 |
| ·5'RACE扩增 | 第36-37页 |
| ·中国李软化相关基因的拼接及氨基酸序列特性分析 | 第37-42页 |
| ·中国李PsGAL基因序列分析 | 第37-39页 |
| ·中国李PsMAN基因序列分析 | 第39-40页 |
| ·中国李PsAFA基因序列分析 | 第40-41页 |
| ·中国李PsEXP基因序列分析 | 第41-42页 |
| ·中国李果实软化相关基因同源性分析 | 第42-49页 |
| ·中国李果实软化相关基因结构功能域分析 | 第49-50页 |
| ·中国李果实软化相关基因二级结构和三维立体结构的预测 | 第50-54页 |
| 4. 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 中国李果实软化相关基因表达特性分析 | 第56-64页 |
| 摘要 | 第56页 |
| 1 材料及其处理 | 第56页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·处理方法 | 第56页 |
| 2 实验方法 | 第56-58页 |
| ·果实硬度的测定 | 第56页 |
| ·果实组织中总RNA的提取及基因组DNA的去除 | 第56-57页 |
| ·反转录合成cDNA第一条链 | 第57页 |
| ·引物的设计 | 第57-58页 |
| ·实时定量PCR | 第58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-62页 |
| ·不同处理条件下果实硬度的变化 | 第58-59页 |
| ·中国李PsGAL基因表达分析 | 第59页 |
| ·中国李PsMAN基因表达分析 | 第59-60页 |
| ·中国李PsAFA基因表达分析 | 第60-61页 |
| ·中国李PsEXP基因表达分析 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 全文结论 | 第64-65页 |
| 创新点 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 附录 | 第74-78页 |
| 附录1:本论文常用储备液配制 | 第75-76页 |
| 附录2:本论文中所用的DH5α感受态CCMB80的制备 | 第76-78页 |
| 硕士在读期间发表的论文 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
