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苏云金芽胞杆菌菌株Bt11和GS8的研究

摘要第1-7页
Abstract第7-15页
第1章 引言第15-30页
   ·苏云金芽胞杆菌第15-24页
     ·杀虫毒素第16-22页
     ·杀虫蛋白与其它物质间的增效第22-23页
     ·杀虫晶体蛋白的应用第23-24页
   ·昆虫抗性的产生,抗性机制与抗性治理策略第24-25页
   ·昆虫中肠围食膜的研究进展第25-29页
     ·围食膜蛋白的种类及其特性第26页
     ·围食膜的形成机理及破坏机制第26-29页
   ·本研究的目的和意义第29-30页
第2章 Bt 菌株GS8 和Bt11 生物学特性研究第30-41页
   ·材料与方法第30-33页
     ·材料第30-32页
     ·方法第32-33页
   ·结果与分析第33-39页
     ·菌株培养性状及形态观察第33-34页
     ·培养特征和生理生化反应第34-35页
     ·菌株GS8 和Bt11 的生长特性第35-36页
     ·菌株的生物活性测定第36页
     ·杀虫晶体蛋白SDS-PAGE 分析第36-37页
     ·质粒分析第37页
     ·PCR-RFLP 鉴定结果第37-39页
   ·讨论第39-40页
   ·小结第40-41页
第3章 cry9Ea 基因的克隆表达及相关分析第41-56页
   ·材料与方法第41-47页
     ·材料第41-43页
     ·研究方法第43-47页
   ·结果与分析第47-54页
     ·cry9Ea 基因的PCR 扩增第47页
     ·cry9Ea 基因的克隆第47-48页
     ·cry9Ea 基因的序列测定与分析第48页
     ·Cry9Ea6 氨基酸序列及蛋白质特性分析第48-51页
     ·Cry9Ea6 蛋白的表达第51-52页
     ·Cry9Ea6 蛋白的可溶性分析及定量分析第52-53页
     ·Cry9Ea6 蛋白生物活性测定第53-54页
   ·讨论第54-55页
   ·小结第55-56页
第4章 cry1I 基因的克隆表达及相关分析第56-72页
   ·材料与方法第56-58页
     ·材料第56页
     ·研究方法第56-58页
   ·结果与分析第58-70页
     ·cry1Ia 和 cry1Ib 基因的 PCR 扩增第58-59页
     ·cry1Ia 和 cry1Ib 基因的克隆第59-60页
     ·cry1Ia 和 cry1Ib 基因的序列测定与分析第60页
     ·Cry1Ia 和 Cry1Ib 氨基酸序列及蛋白质特性分析第60-65页
     ·Cry1Ia14 和 Cry1Ib3 蛋白的表达第65-66页
     ·Cry1Ia14 和 Cry1Ib3 蛋白的可溶性分析及定量第66-67页
     ·Cry1Ia14 和 Cry1Ib3 蛋白生物活性测定第67-70页
   ·讨论第70-71页
   ·小结第71-72页
第5章 工程菌的构建第72-87页
   ·材料与方法第72-78页
     ·菌株与载体第72页
     ·培养基第72页
     ·抗生素第72页
     ·试剂第72-73页
     ·研究方法第73-78页
   ·结果与分析第78-84页
     ·穿梭表达载体的构建第78-79页
     ·工程菌 HD9EA、HD1IA 和 HD1IB 的构建和验证第79-80页
     ·工程菌 HD9EA、HD1IA 和 HD1IB 的 SDS-PAGE 检测第80页
     ·晶体形态检测第80-81页
     ·工程菌 HD9EA、HD1IA 和 HD1IB 的生长特性第81页
     ·工程菌的遗传稳定性第81-82页
     ·晶体蛋白的提取及定量第82-83页
     ·工程菌的生物活性测定第83-84页
   ·讨论第84-86页
   ·小结第86-87页
第6章 Cry 蛋白抗体的制备第87-97页
   ·材料和方法第87-89页
     ·材料第87-88页
     ·研究方法第88-89页
   ·结果第89-95页
     ·cry1Ia14 基因的克隆第89-90页
     ·重组质粒 p301IA 的构建与目的蛋白的表达第90-93页
     ·Cry1Ia14 蛋白的纯化第93-94页
     ·Cry9Ea6 晶体蛋白的提取和纯化第94页
     ·Cry1Ia14 和 Cry9Ea6 蛋白的多克隆抗体制备及检测第94-95页
   ·讨论第95-96页
   ·小结第96-97页
第7章 Bt 毒蛋白杀虫机理的初步研究第97-112页
   ·材料与方法第97-102页
     ·供试昆虫及菌株第97页
     ·主要试剂第97页
     ·部分存储液、缓冲液配方蛋白质电泳试剂及缓冲液第97-98页
     ·主要仪器设备第98-99页
     ·Bt Cry9Ea6 晶体蛋白和 Cry1Ia14 融合蛋白的提取第99页
     ·蛋白浓度的测定第99页
     ·甜菜夜蛾、粉纹夜蛾中肠围食膜的提取第99页
     ·Trypsin 消化Cry 蛋白第99页
     ·Trypsin 消化后的蛋白生物活性测定第99页
     ·Trypsin 消化后的蛋白处理甜菜夜蛾围食膜和粉纹夜蛾围食膜第99页
     ·毒素蛋白对甜菜夜蛾和粉纹夜蛾中肠围食膜的影响第99-100页
     ·SDS-PAGE 凝胶硝酸银染色第100页
     ·石蜡切片的制作第100-101页
     ·甜菜夜蛾和粉纹夜蛾中肠BBMV 的提取第101页
     ·甜菜夜蛾和粉纹夜蛾中肠BBMV 的SDS-PAGE 电泳检测第101页
     ·甜菜夜蛾和粉纹夜蛾中肠BBMV 的Western 印迹第101-102页
   ·结果与分析第102-110页
     ·Trypsin 消化Cry 蛋白第102-103页
     ·Trypsin 消化Cry 蛋白后生物活性测定结果第103-104页
     ·Cry 蛋白处理甜菜夜蛾围食膜和粉纹夜蛾围食膜第104-105页
     ·Cry 蛋白对甜菜夜蛾、粉纹夜蛾中肠的影响第105-108页
     ·中肠BBMV 的制备及特性研究第108-110页
   ·讨论第110-111页
   ·小结第111-112页
全文结论第112-113页
参考文献第113-126页
附录第126-132页
在读期间发表的学术论文第132-133页
作者简历第133-134页
致谢第134-135页

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