| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 英文缩写目录 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-34页 |
| ·肽基脯氨酰顺反异构酶(PPlase)家族 | 第15-16页 |
| ·Pin1蛋白家族组成与分布 | 第16-21页 |
| ·Human Pin1蛋白 | 第17-19页 |
| ·Arabidopsis thaliana Pin1蛋白 | 第19页 |
| ·Trypanosoma brucei Pin1蛋白 | 第19-20页 |
| ·Escherichia coli Par10蛋白 | 第20-21页 |
| ·Pin1的功能调控 | 第21页 |
| ·Pin1与细胞周期调控 | 第21-25页 |
| ·Pin1与cyclinD | 第21-23页 |
| ·Pin1与cdc25 | 第23-24页 |
| ·Pin1与P53 | 第24-25页 |
| ·Pin1与RNA聚合酶Ⅱ | 第25页 |
| ·Pin1与各种疾病的关系 | 第25-28页 |
| ·Pin1与癌症 | 第25-26页 |
| ·Pin1与老年痴呆症(Alzheimer's disease,AD) | 第26-28页 |
| ·蛋白质晶体学原理与结晶优化 | 第28-31页 |
| ·蛋白质的结晶原理和方法 | 第28-29页 |
| ·蛋白质的均一性对结晶的影响 | 第29页 |
| ·蛋白质结晶条件的筛选和优化 | 第29-31页 |
| ·蛋白质结构解析 | 第31-32页 |
| ·本课题的研究目的与意义 | 第32-34页 |
| 2 材料和方法 | 第34-46页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·细菌菌株及载体 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·主要溶液的配制 | 第34-36页 |
| ·实验方法 | 第36-46页 |
| ·分子克隆和表达载体的构建 | 第36-39页 |
| ·E.Coli BL21(DE3)感受态的制备 | 第39-40页 |
| ·重组质粒转化E.coli BL21(DE3) | 第40页 |
| ·重组质粒表达的小量检测 | 第40页 |
| ·高效表达条件的研究 | 第40-41页 |
| ·高效表达 | 第41页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第41页 |
| ·菌体的收集与破碎 | 第41-42页 |
| ·Pin1蛋白的分离纯化 | 第42-43页 |
| ·蛋白溶液的浓度测定—Bradford分析法 | 第43页 |
| ·Pin1蛋白的圆二色谱分析 | 第43-44页 |
| ·Pin1蛋白的结晶 | 第44页 |
| ·晶体数据的收集和处理——晶体结构解析 | 第44-46页 |
| 3 结果和分析 | 第46-63页 |
| ·分子克隆和表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·蛋白的表达及其分离纯化 | 第47-53页 |
| ·pET 28b/Human Pin1质粒的表达 | 第47页 |
| ·Pin1蛋白的分离纯化 | 第47-53页 |
| ·Pin1蛋白的浓缩及浓度的测定 | 第53页 |
| ·圆二色谱分析 | 第53-56页 |
| ·Pin1蛋白质的结晶和数据收集 | 第56-58页 |
| ·Pin1晶体结构解析 | 第58-63页 |
| 4 讨论 | 第63-69页 |
| ·突变位点的选择 | 第63页 |
| ·Pin1蛋白的结晶 | 第63-65页 |
| ·结晶方法的选择 | 第63-64页 |
| ·蛋白样品的处理 | 第64页 |
| ·晶体生长的条件 | 第64-65页 |
| ·Pin1催化反应机理 | 第65-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
