| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 本论文的缩写词表 | 第10-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1 甲羟戊酸 | 第13-17页 |
| ·甲羟戊酸简介 | 第13页 |
| ·甲羟戊酸的合成 | 第13-14页 |
| ·甲羟戊酸(MVA)途径 | 第14-16页 |
| ·甲羟戊酸的检测 | 第16-17页 |
| 2 萜类物质 | 第17-21页 |
| ·简介 | 第17-18页 |
| ·萜类种类 | 第18-19页 |
| ·萜类合成 | 第19-21页 |
| 3 代谢工程手段在甲羟戊酸途径中的应用 | 第21-24页 |
| ·代谢工程 | 第21页 |
| ·MVA途径代谢工程研究进展 | 第21-24页 |
| ·细菌MVA代谢工程 | 第21-22页 |
| ·酵母MVA代谢工程 | 第22-23页 |
| ·植物MVA代谢工程 | 第23-24页 |
| 4 论文的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 实验部分 | 第25-66页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第25-32页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌种和质粒 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·酶和试剂盒 | 第26-27页 |
| ·溶液 | 第27-29页 |
| ·实验仪器 | 第29-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-47页 |
| ·E.faecalis基因组的提取 | 第32页 |
| ·pUC18-mvaS的构建 | 第32-39页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增基因片段 | 第33页 |
| ·PCR产物纯化 | 第33-34页 |
| ·碱裂解法制备载体质粒 | 第34-35页 |
| ·试剂盒法小量制备质粒 | 第35页 |
| ·两步法简单提质粒 | 第35-36页 |
| ·载体和目的基因的限制性内切酶消化反应 | 第36页 |
| ·酶切片段的切胶回收纯化 | 第36-37页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·菌落PCR验证重组子 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的提取 | 第39页 |
| ·重组质粒的酶切验证 | 第39页 |
| ·HMGS的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·mvaS的定点突变 | 第40-42页 |
| ·突变引物设计 | 第40-41页 |
| ·定点突变操作方法 | 第41-42页 |
| ·pUC18-mvaS_(G110)-mvaE的构建 | 第42-43页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·载体构建 | 第42-43页 |
| ·HMGR的诱导表达 | 第43页 |
| ·mvaK1,mvaD,mvaK2的克隆 | 第43-44页 |
| ·引物设计 | 第43页 |
| ·载体构建 | 第43-44页 |
| ·DH5α △ ptsG/pZYSE产物甲羟戊酸的检测 | 第44-45页 |
| ·菌株构建 | 第44页 |
| ·发酵过程 | 第44-45页 |
| ·产物检测 | 第45页 |
| ·不同菌株甲羟戊酸产量比较 | 第45-46页 |
| ·菌株构建 | 第45-46页 |
| ·发酵过程 | 第46页 |
| ·产物检测 | 第46页 |
| ·不同培养基发酵甲羟戊酸产量比较 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-66页 |
| ·pUC18-mvaS的构建 | 第47-49页 |
| ·HMGS的诱导表达 | 第49页 |
| ·mvaS的定点突变 | 第49-51页 |
| ·pUC18-mvaS_(G110)-mvaE的构建 | 第51-53页 |
| ·HMGR的诱导表达 | 第53-54页 |
| ·mvaK1,mvaD,mvaK2的克隆 | 第54-56页 |
| ·DH5 α △ptsG/pZYSE产物甲羟戊酸的检测 | 第56-59页 |
| ·不同菌株甲羟戊酸产量比较 | 第59-63页 |
| ·不同培养基发酵甲羟戊酸产量比较 | 第63-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第71-72页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第72页 |
