| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一前言 | 第13-28页 |
| 第一节 我国扇贝养殖现状及大规模死亡的原因 | 第13-16页 |
| 1. 我国扇贝养殖现状 | 第13页 |
| 2. 影响扇贝大规模死亡的因素 | 第13-16页 |
| ·环境污染 | 第14页 |
| ·病原微生物 | 第14-15页 |
| ·扇贝生物本身的抗逆能力 | 第15-16页 |
| 第二节 热休克蛋白22 | 第16-24页 |
| 1. 热休克蛋白的发现及分类 | 第17-18页 |
| 2.H SP22 的结构特征和组织分布 | 第18页 |
| 3.H SP22 基因结构和表达调控 | 第18-19页 |
| 4.H SP22 的生物学功能 | 第19-22页 |
| ·分子伴侣作用 | 第20页 |
| ·调节细胞凋亡 | 第20页 |
| ·HSP22 与衰老 | 第20-21页 |
| ·HSP22 与生物耐热 | 第21页 |
| ·抗氧化作用 | 第21-22页 |
| 5 HSP22的研究现状 | 第22-24页 |
| ·HSP22 与肿瘤 | 第22页 |
| ·HSP22 与腓骨肌萎缩症 | 第22-23页 |
| ·HSP22 与心肌缺血再灌注损伤 | 第23页 |
| ·HSP22 在海洋生物学方面的研究 | 第23-24页 |
| 第三节 单核苷酸多态性 | 第24-27页 |
| 1. 单核苷酸多态性的概念 | 第24页 |
| 2. 单核苷酸多态性的检测方法 | 第24-26页 |
| 3. 单核苷酸多态性的应用 | 第26-27页 |
| 第四节 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 1. 本研究的目的 | 第27页 |
| 2. 本研究的意义 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-42页 |
| 第一节 材料 | 第28-31页 |
| 1. 主要化学试剂与仪器设备 | 第28页 |
| ·主要化学试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28页 |
| 2. 试剂和培养基的配置 | 第28-31页 |
| ·DNA 提取试剂及其配置方法 | 第29页 |
| ·培养基及抗生素配置方法 | 第29-30页 |
| ·其它主要试剂配置方法 | 第30-31页 |
| 第二节 方法 | 第31-42页 |
| 1. 应激实验样品及样品处理 | 第31-32页 |
| ·重金属和细菌应激实验 | 第31页 |
| ·高温刺激实验 | 第31-32页 |
| 2. 扇贝基因组 DNA 提取 | 第32页 |
| 3. 扇贝总 RNA 提取 | 第32-33页 |
| ·实验用品的预处理 | 第32页 |
| ·扇贝总 RNA 的提取 | 第32-33页 |
| ·DNase I 消化 | 第33页 |
| 4.c DNA 文库的构建及序列分析 | 第33-34页 |
| ·cDNA 文库的构建 | 第33-34页 |
| ·序列分析与目的基因片段的获得 | 第34页 |
| 5.全长cDNA序列的获得 | 第34-36页 |
| ·扇贝cDNA 模板第一链的合成 | 第34页 |
| ·PCR 反应体系与反应条件 | 第34-35页 |
| ·3' RACE 扩增 | 第35页 |
| ·5' RACE 扩增 | 第35-36页 |
| 6. 琼脂糖凝胶纯化 PCR 产物 | 第36-37页 |
| 7. 感受态细胞的制备、连接及转化 | 第37-38页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·连接反应 | 第37页 |
| ·转化 | 第37-38页 |
| 8. 目的基因的生物信息学分析 | 第38页 |
| 9. 荧光实时定量 PCR 检测目的基因的表达 | 第38-42页 |
| ·荧光实时定量 PCR 的原理 | 第38-40页 |
| ·荧光实时定量 PCR 的引物设计 | 第40-41页 |
| ·荧光实时定量 PCR 检测目的基因的表达 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第42-76页 |
| 第一节 海湾扇贝热休克蛋白22 基因的克隆与表达分析 | 第42-51页 |
| 1. 海湾扇贝热休克蛋白22 基因cDNA 全长的克隆 | 第42-43页 |
| ·海湾扇贝热休克蛋白22 基因3’末端的克隆 | 第42页 |
| ·海湾扇贝热休克蛋白22 基因5’末端的克隆 | 第42-43页 |
| 2. 海湾扇贝热休克蛋白22 基因的序列分析 | 第43-45页 |
| 3. 海湾扇贝热休克蛋白22 基因的同源性分析 | 第45-47页 |
| 4. 海湾扇贝热休克蛋白22 基因的进化分析 | 第47页 |
| 5. 海湾扇贝热休克蛋白22 基因在扇贝组织中的分布 | 第47-49页 |
| 6. 海湾扇贝热休克蛋白22 基因在重金属刺激下的表达规律研究 | 第49-51页 |
| 第二节 栉孔扇贝热休克蛋白22 基因的克隆与表达分析 | 第51-60页 |
| 1. 栉孔扇贝热休克蛋白22 基因cDNA 全长的克隆 | 第51-52页 |
| ·栉孔扇贝热休克蛋白22 基因3’末端的克隆 | 第51页 |
| ·栉孔扇贝热休克蛋白 22 基因 5’末端的克隆 | 第51-52页 |
| 2. 栉孔扇贝热休克蛋白22 基因的序列分析 | 第52-54页 |
| 3. 栉孔扇贝热休克蛋白22 基因的同源性分析 | 第54-56页 |
| 4. 栉孔扇贝热休克蛋白 22 的进化分析 | 第56-57页 |
| 5. 栉孔扇贝热休克蛋白22 基因在扇贝组织中的分布 | 第57-59页 |
| 6. 栉孔扇贝热休克蛋白22 基因在鳗弧菌刺激下的表达规律研究 | 第59-60页 |
| 第三节 栉孔扇贝 HSP22 基因的多态性分析 | 第60-64页 |
| 1. 栉孔扇贝 HSP22 基因潜在 SNP 位点的电子筛查 | 第60-61页 |
| 2. 栉孔扇贝 HSP22 基因有潜在 SNP 位点的序列的克隆 | 第61-62页 |
| 3. 序列比较与多态性分析 | 第62-64页 |
| 第四节 栉孔扇贝热休克蛋白22 基因的 SNP 位点+94 C/ A 与扇贝抗热性的关系 | 第64-69页 |
| 1. 热敏感群体和抗热群体的划分及取样 | 第64-65页 |
| 2. 采用 Bi-PASA PCR 技术对热休克蛋白22 基因+94 位点多态性进行检测 | 第65-67页 |
| ·引物设计 | 第65页 |
| ·PCR 扩增及电泳 | 第65-66页 |
| ·栉孔扇贝热休克蛋白22 基因+94 位点多态性的检测结果 | 第66-67页 |
| 3.C fHSP22 基因+94 位点多态性与扇贝抗热性状的关系分析 | 第67-68页 |
| ·统计基因位点的基因频率及基因型频率 | 第67-68页 |
| ·对多态性位点的 Hardy-Weinberg 平衡性及与栉孔扇贝抗热性性状的关联性进行分析 | 第68页 |
| ·CfHSP22 基因+94 位点多态性与扇贝抗热性状的关系分析结果 | 第68页 |
| 4. +94 位点不同基因型扇贝的死亡率比较 | 第68-69页 |
| 第五节 讨论 | 第69-76页 |
| 1. 海湾扇贝 HSP22 基因的克隆及其在重金属刺激下的表达研究 | 第70-72页 |
| 2. 栉孔扇贝 HSP22 基因的克隆及其在鳗弧菌刺激下的表达研究 | 第72-74页 |
| 3. 栉孔扇贝 HSP22 基因与抗热性状相关的 SNP 位点的筛查与验证 | 第74-76页 |
| 第四章 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 个人简历 | 第87页 |
| 发表的学术论文 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
