| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-27页 |
| 1.miRNA 的发现 | 第12-13页 |
| 2.miRNA 的生成和作用机制 | 第13-14页 |
| 3.miRNA 与siRNA 的异同 | 第14-15页 |
| 4.miRNA 的研究进展 | 第15-18页 |
| 5.miRNA 研究方法 | 第18-21页 |
| 6. 研究目的和内容 | 第21页 |
| 7. 技术路线 | 第21-22页 |
| 8. 创新点 | 第22页 |
| 9. 研究意义 | 第22-27页 |
| 第二章 miRNA 的提取、纯化及分离 | 第27-52页 |
| 1. 前言 | 第27-28页 |
| 2. 仪器与试剂 | 第28-31页 |
| 3. 实验方法 | 第31-41页 |
| ·肝癌血清中总RNA 的提取 | 第31-33页 |
| ·Trizol 法提取总RNA | 第31页 |
| ·RNAiso~(TM) plus 试剂提取总RNA | 第31-32页 |
| ·mirVana~(TM) PARIS~(~(TM)) kit 提取小分子 RNA | 第32页 |
| ·m iRcute miRNA 提取分离试剂盒提取小分子RNA | 第32-33页 |
| ·肝癌血清miRNA 的分离和检测研究 | 第33-41页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳法及放射性自显影法检测miRNA | 第33-35页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测miRNA | 第33-34页 |
| ·同位素放射性自显影法检测miRNA | 第34-35页 |
| ·PCR 扩增法分离检测miRNA | 第35-41页 |
| ·已知小分子核酸接头连接研究 | 第36-39页 |
| ·3'端接头的连接及PCR 扩增法检测 | 第36-37页 |
| ·3'端连接产物单链的制备及PCR 扩增法检测 | 第37-38页 |
| ·5'端接头的连接及PCR 扩增法检测 | 第38-39页 |
| ·肝癌血清miRNA 的3'端和5'端接头的连接 | 第39-41页 |
| ·3'端接头的连接 | 第39页 |
| ·5'端接头的连接 | 第39页 |
| ·miRNA 的RT-PCR 获得cDNA | 第39-41页 |
| ·miRNA 的cDNA 扩增及电泳检测鉴定 | 第41页 |
| 4 结果与讨论 | 第41-50页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳法及放射性自显影法检测总RNA 及小分子RNA | 第41-44页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测总RNA | 第41-43页 |
| ·同位素放射性自显影法检测肝癌血清miRNA | 第43-44页 |
| ·PCR 扩增法分离检测miRNA | 第44-50页 |
| ·已知小分子核酸接头连接研究 | 第45-48页 |
| ·3'端接头的连接及PCR 扩增法检测 | 第45页 |
| ·3'端连接产物单链的制备及PCR 扩增法检测 | 第45-46页 |
| ·5’端接头的连接及PCR 扩增法检测 | 第46-48页 |
| ·肝癌血清miRNA 的3'端和5'端接头的连接 | 第48-50页 |
| ·3'端接头的连接 | 第48-49页 |
| ·5'端接头的连接 | 第49页 |
| ·miRNA 的cDNA 扩增及电泳检测鉴定 | 第49-50页 |
| 5. 小结 | 第50-52页 |
| 第三章 miRNA 的克隆及测序 | 第52-66页 |
| 1. 前言 | 第52页 |
| 2. 仪器与试剂 | 第52-54页 |
| 3 实验方法 | 第54-59页 |
| ·肝癌血清miRNA 与T 载体的连接 | 第54-56页 |
| ·大肠杆菌JM109 感受态细胞的制备-CaCl_2 及检测 | 第56-57页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第56页 |
| ·感受态细胞转化的检测 | 第56-57页 |
| ·转化 | 第57页 |
| ·P CR 法初步鉴定阳性克隆 | 第57-58页 |
| ·序列测定 | 第58-59页 |
| 4. 结果与讨论 | 第59-65页 |
| ·肝癌血清miRNA 与T 载体的连接 | 第59页 |
| ·大肠杆菌JM109 感受态细胞的制备-CaCl_2 | 第59页 |
| ·转化 | 第59-61页 |
| ·交错PCR 法初步鉴定 | 第61-62页 |
| ·已知小核酸片段转化后实验结果图 | 第61-62页 |
| ·肝癌血清miRNA 交错PCR 法初步鉴定 | 第62页 |
| ·序列测定 | 第62-65页 |
| ·已知小分子核酸测序结果 | 第63页 |
| ·肝癌血清miRNA 测序结果 | 第63-65页 |
| 5. 小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-67页 |
| 中英文缩写对照表 | 第67-68页 |
| 攻读硕士期间发表的文章 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
