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连接粘附分子2在小鼠早期妊娠子宫中的表达、调节与功能

中文摘要第1-14页
英文摘要第14-16页
1 引言第16-30页
   ·胚胎着床研究概况第16-18页
     ·胚胎着床的必要条件第16-17页
     ·胚胎着床过程中的类固醇激素第17-18页
   ·细胞粘附分子第18-21页
     ·细胞粘附分子的分类第18-19页
     ·细胞粘附分子与胚胎着床第19-21页
   ·JAM 家族的成员、结构特征、表达及定位第21-23页
     ·JAM 家族成员第21-22页
     ·JAMs 的结构特征第22页
     ·JAMs 的表达及定位第22-23页
   ·JAM 蛋白的作用方式第23-24页
     ·同亲性相互作用第23页
     ·异亲性相互作用第23-24页
   ·JAM 家族成员的功能第24-27页
     ·细胞连接的装配和稳定第24-25页
     ·JAM 家族成员在炎症反应中的作用第25-26页
     ·JAM 家族成员与血小板激活第26-27页
     ·JAM 家族成员与血管发生第27页
   ·JAM 家族成员与哺乳动物生殖第27-28页
     ·JAMs 与雄性生殖第27页
     ·JAMs 与雌性生殖第27-28页
   ·胚胎着床与炎症反应中白细胞渗出的相似性第28-29页
   ·本研究的目的和意义第29-30页
2 材料与方法第30-48页
   ·实验动物第30页
   ·实验动物模型第30-32页
     ·早期妊娠模型第30页
     ·假孕模型第30页
     ·延迟着床与延迟着床激活模型第30-31页
     ·类固醇激素处理模型第31页
     ·小鼠子宫内膜腔上皮的分离第31-32页
   ·原位杂交探针的制备第32-36页
     ·探针引物设计及合成第32页
     ·提取总RNA第32-33页
     ·消化残留的DNA第33页
     ·反转录第33页
     ·PCR 反应第33-34页
     ·扩增产物的回收及载体连接第34页
     ·感受态细胞的制备第34-35页
     ·重组质粒的转化、测序及方向鉴定第35页
     ·cRNA 片段的体外转录和地高辛标记第35-36页
   ·原位杂交第36-38页
     ·载玻片的处理第36页
     ·冰冻切片方法第36页
     ·试剂及溶液的配制第36-37页
     ·原位杂交流程第37-38页
   ·免疫组织化学第38页
     ·冰冻切片的制备第38页
     ·免疫组织化学流程第38页
   ·Real-time PCR第38-40页
     ·总RNA 的提取第38-39页
     ·引物序列第39-40页
     ·Real-time PCR第40页
   ·体外培养子宫内膜腔上皮的处理第40-41页
     ·LIF 处理第40-41页
     ·Stat3 磷酸化抑制剂处理第41页
     ·孕酮处理第41页
   ·真核过表达载体的构建第41-42页
     ·Msx1 真核表达载体系统的构建第41-42页
     ·持续激活的c-Stat3 Flag cRC/CMV 载体第42页
   ·电穿孔实验第42-43页
   ·Western Blot第43-46页
     ·样品的提取第43页
     ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳第43-44页
     ·免疫印记及显影第44页
     ·相关药品和溶液的制备第44-46页
   ·胚胎黏附实验第46-48页
     ·r-mJam2 重组蛋白的包被第46页
     ·孵化囊胚的获取第46页
     ·黏附实验及结果的判定第46页
     ·可溶性重组蛋白对胚胎黏附的影响第46-47页
     ·相关溶液的配制第47-48页
   ·在早期妊娠小鼠子宫角内注射抗体第48页
3 实验结果第48-65页
   ·Jam2 在小鼠早期妊娠子宫中的表达第48-51页
     ·Jam2 在小鼠早期妊娠子宫中的定位表达第48-49页
     ·Jam2 在小鼠早期妊娠子宫中的定量表达第49-50页
     ·Jam2 在假孕小鼠子宫中的表达第50页
     ·Jam2 在小鼠子宫延迟着床和延迟着床激活模型中的表达第50-51页
     ·Jam2 在激素处理模型中的表达第51页
   ·孕酮对小鼠子宫中Jam2 表达的影响第51-55页
     ·孕酮对卵巢切除小鼠子宫中Jam2 表达的影响第51-52页
     ·孕酮对体外培养的子宫内膜腔上皮中Jam2 表达的影响第52-53页
     ·RU486 影响外源性孕酮诱导的Jam2 上调第53-54页
     ·RU486 影响内源性孕酮诱导的Jam2 上调第54-55页
   ·转录因子Msx1 对小鼠子宫腔上皮中Jam2 表达的影响第55-57页
   ·雌激素对小鼠子宫中Jam2 表达的影响第57-58页
   ·LIF 及Stat3 对小鼠子宫腔上皮中Jam2 表达的影响第58-60页
     ·LIF 对小鼠子宫腔上皮中Jam2 表达的影响第58页
     ·Stat3 磷酸化抑制剂对小鼠子宫腔上皮中Jam2 表达的影响第58-60页
     ·Stat3 持续激活对小鼠子宫腔上皮中Jam2 表达的影响第60页
   ·Jam2 对小鼠孵化囊胚粘附的影响第60-61页
   ·子宫角注射Jam2 抗体对胚胎着床的影响第61-62页
   ·着床前胚胎中Jam2 mRNA 的表达第62-63页
   ·其他JAM 家族及其相关分子mRNA 以及CD31 的表达第63-65页
     ·Jam1 的表达第63页
     ·Jam3 的表达第63页
     ·Jam4 的表达第63页
     ·Esam 的表达第63页
     ·Cxadr 的表达第63-64页
     ·内皮细胞标志分子CD31 的表达第64-65页
4 讨论第65-73页
   ·孕酮及其下游通路诱导Jam2 的表达第65-66页
     ·Jam2 表达受到孕酮的诱导第65-66页
     ·转录因子Msx1 介导孕酮对于Jam2 的诱导第66页
   ·雌激素及下游通路调节Jam2 的表达第66-68页
     ·LIF 促进小鼠子宫腔上皮组织中Jam2 的表达第66-67页
     ·Stat3 磷酸化促进小鼠子宫腔上皮组织中Jam2 的表达第67-68页
   ·Jam2 与胚胎的定位与粘附第68-70页
     ·Jam2 促进胚胎黏附到子宫内膜腔上皮上第68-69页
     ·Jam2 促进胚胎黏附的可能机制第69-70页
   ·其他 JAM 家族成员与小鼠早期妊娠第70-73页
     ·JAM 家族成员与母体子宫-胚胎之间的免疫屏障第70-71页
     ·JAM 家族成员在小鼠早期妊娠子宫中的血管内皮中的作用第71-73页
5 结论第73-74页
致谢第74-75页
参考文献第75-86页
图版第86-96页
攻读博士学位期间发表的学术论文第96页

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