| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-25页 |
| ·研究结核病诊断的意义 | 第10-17页 |
| ·结核病国内外现状 | 第10-12页 |
| ·结核病诊断策略 | 第12-17页 |
| ·细菌学检查 | 第12页 |
| ·分子生物学诊断 | 第12-15页 |
| ·免疫学检查 | 第15-16页 |
| ·结核病诊断新技术 | 第16-17页 |
| ·分子生物学与结核诊断抗原的研究 | 第17-25页 |
| ·反向遗传学技术与确定结核分枝杆菌抗原蛋白 | 第17页 |
| ·蛋白质组学技术与确定结核分枝杆菌抗原蛋白 | 第17页 |
| ·比较基因组学和生物信息学与确认卡介苗缺失区 | 第17-19页 |
| ·卡介苗缺失区蛋白作为诊断试剂的潜力 | 第19-21页 |
| ·其他抗原的诊断潜力 | 第21-24页 |
| ·单一抗原 | 第21-23页 |
| ·几种融合蛋白 | 第23-24页 |
| ·结核分枝杆菌检测展望 | 第24-25页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第25-38页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株与载体 | 第25页 |
| ·实验材料和试剂盒 | 第25页 |
| ·蛋白电泳试剂以及其他试剂 | 第25-28页 |
| ·蛋白电泳试剂 | 第25-26页 |
| ·蛋白电泳工作液 | 第26-27页 |
| ·考马斯亮蓝染液 | 第27页 |
| ·考马斯亮蓝脱色液 | 第27页 |
| ·Bradford 储存液及工作液 | 第27页 |
| ·其他试剂 | 第27-28页 |
| ·主要的仪器设备 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-38页 |
| ·结核分枝杆菌的培养 | 第29页 |
| ·H37Rv 基因组DNA 抽提(小量细菌基因组DNA 抽提试剂盒) | 第29-30页 |
| ·结核杆菌RD 区基因的克隆、表达及蛋白纯化 | 第30-38页 |
| ·结核分枝杆菌基因Rv0222、Rv3615c、Rv3874 和Rv3875 的引物设计 | 第30页 |
| ·PCR 扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物的纯化与回收 | 第31-32页 |
| ·pET32a(+)质粒的抽提 | 第32-33页 |
| ·PCR 产物与pET32a 载体的双酶切 | 第33页 |
| ·酶切胶回收后的目的基因与pET32a(+)载体的连接 | 第33页 |
| ·CaCl_2 法制备感受态细胞 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第34页 |
| ·快速鉴定重组质粒 | 第34页 |
| ·基因测序及结果分析 | 第34页 |
| ·Isopropyl-D-thiogalaetopyranoside(IPTG)诱导目标蛋白表达 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测IPTG 诱导的蛋白表达 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第35页 |
| ·重组蛋白的亲和纯化 | 第35-36页 |
| ·表达上清液的制备 | 第36页 |
| ·亲和柱的预处理 | 第36页 |
| ·重组蛋白亲和层析纯化步骤 | 第36页 |
| ·重组蛋白的透析 | 第36-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-55页 |
| ·结核分枝杆菌H37RV 株基因组的抽提 | 第38页 |
| ·PET32a（+）质粒的抽提 | 第38-40页 |
| ·目的基因的克隆 | 第40-42页 |
| ·PCR 鉴定重组质粒 | 第42-44页 |
| ·目的基因插入PET32a（+）质粒后测序结果 | 第44-46页 |
| ·重组基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第46-49页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第49-51页 |
| ·Bradford 检测法测定纯化后蛋白浓度 | 第51-55页 |
| 第四章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录 | 第61页 |
| 附录1 重组质粒PET32a-0222 的测序报告 | 第61-63页 |
| 附录2 重组质粒PET32a-3615C的测序报告 | 第63-65页 |
| 附录3 重组质粒PET32a-3874 的测序报告 | 第65-67页 |
| 附录4 重组质粒PET32a-3875 的测序报告 | 第67-69页 |
| 附录5 PET32a(+)载体物理图谱 | 第69-70页 |
| 个人简历 攻读硕士期间发表论文情况 | 第70页 |
