| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-34页 |
| 1. RNAi技术研究 | 第14-22页 |
| ·什么是RNAi | 第14页 |
| ·RNAi技术的起源 | 第14-15页 |
| ·RNAi的分子生物学机理 | 第15-17页 |
| ·RNAi导致基因沉默的特点 | 第17-18页 |
| ·RNAi技术应用 | 第18-22页 |
| 2. 我国食用油消费及油菜生产现状 | 第22-30页 |
| ·油菜品质改良研究 | 第23页 |
| ·提高油菜籽含油率的重要意义 | 第23-24页 |
| ·油菜含油率研究进展 | 第24页 |
| ·植物种子发育过程中油脂的合成机理 | 第24-28页 |
| ·提高油菜含油率研究方法 | 第28-30页 |
| 3. PEPC基因的研究 | 第30-32页 |
| ·PEPC基因的功能 | 第30-32页 |
| ·PEPC基因与油菜种子中蛋白质、油脂形成的关系 | 第32页 |
| 4. 立题思想 | 第32-34页 |
| ·研究目的和立题思路 | 第32-33页 |
| ·主要技术路线图 | 第33-34页 |
| 第二章 PEPC基因片段克隆及RNAi表达载体构建 | 第34-56页 |
| 1、前言 | 第34页 |
| 2. 材料与方法 | 第34-39页 |
| ·植物供体材料、菌株和载体 | 第34-35页 |
| ·试剂、酶和试剂盒 | 第35页 |
| ·DNA提取及酶切反应 | 第35页 |
| ·PEPC基因保守序列及Napin的克隆测序比对 | 第35-36页 |
| ·PEPC基因保守序列克隆及napin启动子克隆测序 | 第36页 |
| ·反向重复框的构建 | 第36页 |
| ·PEPC基因ihpRNA植物表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·质粒载体pBS-B2-NEI-B1DNA甲基化位点检测 | 第37-38页 |
| ·质粒载体的转化 | 第38-39页 |
| 3. 结果与分析 | 第39-52页 |
| ·PEPC基因保守序列查找及功能预测 | 第39-41页 |
| ·不同油菜材料中PEPC保守序列克隆及同源性测序比对 | 第41-42页 |
| ·油菜种子特异型启动子Napin的克隆及测序比对 | 第42-45页 |
| ·种子特异表达载体pCAMNapin的构建 | 第45-46页 |
| ·PEPC保守序列反向重复框的构建 | 第46-47页 |
| ·PEPC基因ihpRNA表达载体的构建 | 第47-50页 |
| ·PEPC基因反向重复框ihpRNA载体中DNA甲基化的测定 | 第50-52页 |
| 4. 讨论 | 第52-56页 |
| ·PEPC基因ihpRNA载体构建的依据 | 第52-53页 |
| ·大肠杆菌对质粒载体中的回文序列的剪接和ihpRNA载体构建 | 第53-54页 |
| ·植物RNA干扰表达载体 | 第54-55页 |
| ·不同启动子的hipRNA | 第55-56页 |
| 第三章 PEPC基因ihpRNA干扰表达载体的遗传转化 | 第56-72页 |
| 1. 前言 | 第56-57页 |
| ·遗传转化方法 | 第56页 |
| ·Floral-dip转化法研究 | 第56-57页 |
| ·Floral-dip转化法评价 | 第57页 |
| 2. 材料与方法 | 第57-62页 |
| ·植物转化受体 | 第57-58页 |
| ·农杆菌、载体 | 第58页 |
| ·RNA干扰载体对甘蓝型油菜的遗传转化 | 第58-59页 |
| ·转化后代的抗性筛选 | 第59页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第59-62页 |
| ·克隆测序及序列比对 | 第62页 |
| 3. 结果与分析 | 第62-70页 |
| ·Floral-dip遗传转化 | 第62-64页 |
| ·子叶、下胚轴遗传转化 | 第64-65页 |
| ·转化后代的抗性筛选及分子检测 | 第65-68页 |
| ·转基因阳性植株克隆测序及序列比对 | 第68-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-72页 |
| ·Floral-dip转化法的转化效果 | 第70页 |
| ·Floral-dip与子叶、下胚轴转化法效果比较 | 第70-72页 |
| 第四章 RNA干扰后代的表达研究、遗传分析及机理探索 | 第72-99页 |
| 1. 前言 | 第72-73页 |
| ·研究基因表达的方法 | 第72-73页 |
| ·实时(荧光)定量PCR及应用 | 第73页 |
| 2. 材料与方法 | 第73-82页 |
| ·植株材料 | 第73-74页 |
| ·定量PCR | 第74-78页 |
| ·T2代植株分子检测 | 第78-81页 |
| ·PEPC基因低表达植株的DNA甲基化检测 | 第81-82页 |
| 3. 结果与分析 | 第82-96页 |
| ·定量PCR Taqman探针法与SYBR染料法比较 | 第82-83页 |
| ·PEPC基因的绝对定量PCR标准曲线的绘制 | 第83-85页 |
| ·PEPC基因的表达分析 | 第85-92页 |
| ·T2代植株的遗传分析 | 第92-94页 |
| ·转化植株PEPC基因甲基化检测 | 第94-96页 |
| 4. 讨论 | 第96-99页 |
| ·PEPC基因表达的时空变化 | 第96-97页 |
| ·转化植株与野生型植株PEPC基因表达的时空及表达量的变化 | 第97页 |
| ·RNA干扰与基因甲基化及基因表达的关系 | 第97-98页 |
| ·荧光定量PCR方法的差异比较 | 第98-99页 |
| 第五章 甘蓝型油菜PEPC基因RNA干扰后代的表型、含油率、蛋白质及脂肪酸分析 | 第99-123页 |
| 1 前言 | 第99-101页 |
| ·油菜籽粗脂肪分析方法 | 第99-100页 |
| ·油菜籽粗蛋白分析方法 | 第100页 |
| ·油菜籽脂肪酸成分分析 | 第100-101页 |
| 2 材料与方法 | 第101-102页 |
| ·实验植株材料 | 第101页 |
| ·油菜籽中蛋白质与油质相关性分析 | 第101页 |
| ·种子含油率、蛋白质测定 | 第101页 |
| ·种子脂肪酸成分分析 | 第101-102页 |
| ·T2代表型及变异植株的观察 | 第102页 |
| 3. 结果与分析 | 第102-120页 |
| ·常规油菜籽蛋白质与油质比例的相关性分析 | 第102-103页 |
| ·转基因油菜与野生型油菜含油率、蛋白质含量的比较 | 第103-112页 |
| ·转基因油菜与野生型油菜脂肪酸成分分析 | 第112-115页 |
| ·T2代植株的表型变异观察 | 第115-120页 |
| 4. 讨论 | 第120-123页 |
| ·油菜籽含油率与蛋白质的关系 | 第120-121页 |
| ·RNAi干扰PEPC基因表达的效果评价 | 第121页 |
| ·转基因油菜的脂肪酸成分及含量变化 | 第121-122页 |
| ·转基因后代的变异分析 | 第122-123页 |
| 第六章 全文结论 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 发表论文情况 | 第137页 |
