| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 PGRN不同Grn片段及衍生蛋白Atsttrin简介 | 第13-15页 |
| 1.1.1 PGRN与Grn片段 | 第13-15页 |
| 1.1.2 PGRN与Atsttrin | 第15页 |
| 1.2 PGRN与Gm多肽的功能相关性 | 第15-17页 |
| 1.2.1 PGRN和Grns都具有生长调节作用 | 第15-16页 |
| 1.2.2 PGRN与Grn多肽在炎症中的作用相反 | 第16页 |
| 1.2.3 PGRN与Grn E能够促进神经细胞的存活及轴突的生长 | 第16-17页 |
| 1.3 PGRN以及Atsttrin抗炎功能研究进展 | 第17页 |
| 1.4 蛋白表达系统及在表达Grn和Atsttrin方面的应用 | 第17-19页 |
| 1.4.1 蛋白表达系统的发展及其应用简介 | 第17-18页 |
| 1.4.2 Grn多肽及Atsttrin的表达研究现状 | 第18-19页 |
| 1.5 课题研究意义 | 第19页 |
| 1.6 研究技术路线 | 第19-21页 |
| 1.6.1 研究的总路线 | 第19-20页 |
| 1.6.2 蛋白酵母表达和原核表达 | 第20-21页 |
| 第2章 hPGRN不同Gm片段基因表达载体的构建 | 第21-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 克隆载体和主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-38页 |
| 2.2.1 载体构建相关实验方法步骤 | 第24-27页 |
| 2.2.2 酵母表达载体的设计 | 第27-35页 |
| 2.2.3 扩增Grn片段基因,连入pGEMT- easy克隆载体并鉴定测序 | 第35-36页 |
| 2.2.4 构建表达HSA蛋白表达载体 | 第36-37页 |
| 2.2.5 构建表达Grn片段的酵母表达载体 | 第37-38页 |
| 2.3 实验结果 | 第38-45页 |
| 2.3.1 四个酵母通用表达载体的构建酶切鉴定 | 第38-44页 |
| 2.3.2 HSA表达载体的构建与酶切鉴定 | 第44页 |
| 2.3.3 Grn片段的基因克隆及其表达载体构建与鉴定 | 第44-45页 |
| 2.4 结论 | 第45-47页 |
| 第3章 Grn片段在毕赤酵母中的表达纯化 | 第47-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-50页 |
| 3.1.1 菌株 | 第47页 |
| 3.1.2 表达载体和主要试剂 | 第47-48页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第48-50页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-58页 |
| 3.2.1 目的基因的转化 | 第51-52页 |
| 3.2.2 PichiaPink~(TM) strains阳性菌株的筛选与重组子的鉴定 | 第52-54页 |
| 3.2.3 pPIC9K表达载体在GS115中高拷贝重组子的筛选与鉴定 | 第54-55页 |
| 3.2.4 目的蛋白在酵母中的诱导表达及鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2.5 表达的蛋白的鉴定 | 第56-57页 |
| 3.2.6 目的蛋白的大量诱导表达 | 第57页 |
| 3.2.7 真核酵母表达蛋白的Ni-NTA亲和层析柱纯化 | 第57-58页 |
| 3.3 实验结果 | 第58-67页 |
| 3.3.1 HSA蛋白的表达纯化 | 第58-61页 |
| 3.3.2 Grn E片段在两套酵母表达系统中的比较 | 第61-65页 |
| 3.3.3 Grn G、Grn F、Grn B、Grn A、Grn C、Grn D在毕赤酵母表达载体中表达鉴定 | 第65页 |
| 3.3.4 Grn P在毕赤酵母中的表达鉴定 | 第65-66页 |
| 3.3.5 HSA-Grns的纯化 | 第66-67页 |
| 3.4 分析讨论 | 第67-69页 |
| 第4章 Grn片段细胞水平功能研究 | 第69-73页 |
| 4.1 实验材料及试剂配置 | 第69页 |
| 4.1.1 细胞株及主要试剂 | 第69页 |
| 4.1.2 主要溶液配置 | 第69页 |
| 4.2 实验方法 | 第69-71页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第69-70页 |
| 4.2.2 HSA-Grns对神经细胞轴突生长的影响研究 | 第70-71页 |
| 4.3 实验结果 | 第71页 |
| 4.4 分析讨论 | 第71-73页 |
| 第5章 Atsttrin的表达纯化及小鼠体内功能研究 | 第73-87页 |
| 5.1 实验材料 | 第73-74页 |
| 5.1.1 实验菌株和实验动物 | 第73页 |
| 5.1.2 表达载体和主要试剂 | 第73页 |
| 5.1.3 实验主要试剂配制 | 第73-74页 |
| 5.1.4 实验主要仪器设备 | 第74页 |
| 5.2 实验方法 | 第74-80页 |
| 5.2.1 Overlap PCR获得Atsttrin基因序列 | 第74-75页 |
| 5.2.2 Atsttrin原核表达载体的构建 | 第75-76页 |
| 5.2.3 Atsttrin的原核表达及蛋白纯化 | 第76-77页 |
| 5.2.4 Atsttrin在皮肤炎小鼠模型中抗炎研究 | 第77-80页 |
| 5.3 实验结果 | 第80-84页 |
| 5.3.1 Atsttrin基因的获得及原核表达载体pRSET-B/Atsttrin的鉴定 | 第80-81页 |
| 5.3.2 Atsttrin的表达纯化及鉴定 | 第81-83页 |
| 5.3.3 在表观以及分子水平检测Atsttrin的抗炎作用 | 第83-84页 |
| 5.4 分析与讨论 | 第84-87页 |
| 第6章 结论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-95页 |
| 附录 | 第95-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
| 攻读硕士学位期间科研成功 | 第103页 |
