| 摘要 | 第11-12页 |
| ABSTRACT | 第12页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 文献综述 | 第14-21页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征的概述 | 第14-16页 |
| 1.1.1 流行病学 | 第14-15页 |
| 1.1.2 PRRSV的病原学特征 | 第15页 |
| 1.1.3 PRRSV的易感细胞 | 第15页 |
| 1.1.4 致病机制 | 第15-16页 |
| 1.2 自噬的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2.1 自噬的发生以及分类 | 第16-17页 |
| 1.2.2 细胞自噬的检测方法 | 第17-19页 |
| 1.2.3 自噬与凋亡的区别 | 第19-20页 |
| 1.2.4 mTOR信号通路的生物学功能 | 第20页 |
| 1.2.5 PI3K和(mTOR)信号通路在(PRRSV)复制中的作用 | 第20-21页 |
| 第一章 树突状细胞的诱导培养及PRRSV毒价的测定 | 第21-29页 |
| 1.1 材料 | 第21-23页 |
| 1.1.1 试验动物及PRRSV来源 | 第21页 |
| 1.1.2 主要耗材 | 第21页 |
| 1.1.3 主要药品以及试剂 | 第21-22页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 1.1.5 药品与试剂的制备 | 第23页 |
| 1.1.6 设计合成引物 | 第23页 |
| 1.2 试验方法 | 第23-26页 |
| 1.2.1 PRRSV的培养 | 第23-24页 |
| 1.2.2 TCID_(50)测定 | 第24页 |
| 1.2.3 猪外周血的采集 | 第24-26页 |
| 1.3 试验结果与分析 | 第26-27页 |
| 1.3.1 TCID_(50)测定结果 | 第26-27页 |
| 1.3.2 树突状细胞原代培养及诱导的结果 | 第27页 |
| 1.4 讨论 | 第27-28页 |
| 1.4.1 影响PRRSV毒价的测定的因素 | 第27页 |
| 1.4.2 影响树突细胞的诱导的因素 | 第27-28页 |
| 1.5 小结 | 第28-29页 |
| 第二章 PRRSV感染对树突状细胞自噬和抗原提呈功能的影响 | 第29-37页 |
| 2.1 材料与方法 | 第29-30页 |
| 2.1.1 实验对象 | 第29页 |
| 2.1.2 实验耗材 | 第29页 |
| 2.1.3 药品及试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第30页 |
| 2.1.5 主要药品与试剂的配制 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 2.2.1 树突状细胞接种PRRSV | 第30页 |
| 2.2.2 MDC染色最佳浓度与最佳时间的确定 | 第30-31页 |
| 2.2.3 PRRSV接种树突状细胞后激光共聚焦的检测 | 第31页 |
| 2.2.4 PRRSV接种树突状细胞后不同时间段病毒载量的检测 | 第31页 |
| 2.2.5 树突状细胞接种PRRSV后自噬基因与抗原提呈基因的检测 | 第31页 |
| 2.2.6 树突状细胞接种PRRSV后凋亡基因的检测 | 第31页 |
| 2.2.7 Western blot方法检测LC 3I/II蛋白的表达量 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.3.1 树突状细胞的形态学变化 | 第31-32页 |
| 2.3.2 MDC最适浓度与时间的筛选结果 | 第32页 |
| 2.3.3 激光共聚焦检测 | 第32-33页 |
| 2.3.4 PRRSV的病毒载量检测结果 | 第33-34页 |
| 2.3.5 树突状细胞自噬和抗原提呈基因的检测结果 | 第34页 |
| 2.3.6 PRRSV感染后凋亡基因的变化情况 | 第34-35页 |
| 2.3.7 PRRSV感染组与正常组DCs的LC3I/II蛋白表达量变化情况 | 第35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 2.5 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 自噬靶蛋白MTOR在PRRSV感染中对树突状细胞抗原提呈功能调控的研究 | 第37-51页 |
| 3.1 材料 | 第37-39页 |
| 3.1.1 主要耗材 | 第37页 |
| 3.1.2 主要药品与试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第38页 |
| 3.1.4 主要药品与试剂的配制 | 第38-39页 |
| 3.1.5 设计合成引物 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-44页 |
| 3.2.1 自噬激活剂Rapa最适浓度和时间的筛选 | 第39-40页 |
| 3.2.2 自噬抑制剂3-MA最适浓度和时间的筛选 | 第40页 |
| 3.2.3 不同处理组经过MDC染色后的倒置荧光显微镜观察 | 第40页 |
| 3.2.4 不同处理组经过MDC染色后的激光共聚焦显微镜观察 | 第40页 |
| 3.2.5 Rapa与3-Ma对PRRSV的病毒载量影响的检测 | 第40页 |
| 3.2.6 不同处理组自噬基因与抗原提呈基因的检测 | 第40-41页 |
| 3.2.7 Rapa/3-MA预处理1h后加入PRRSV与Rapa/3-MA和PRRSV同时加入的自噬与抗原提呈基因的检测 | 第41-42页 |
| 3.2.8 Western Blot检测自噬相关蛋白的表达量 | 第42-44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-49页 |
| 3.3.1 Rapa最适浓度与时间的筛选 | 第44-45页 |
| 3.3.2 3-MA最适浓度与最适时间的筛选 | 第45页 |
| 3.3.3 树突状细胞经不同处理后在倒置荧光显微镜下的结果 | 第45-46页 |
| 3.3.4 树突状细胞的不同处理组在激光共聚焦下的观察结果 | 第46页 |
| 3.3.5 PRRSV病毒载量的变化 | 第46-47页 |
| 3.3.6 Rapa、3-MA、PRRSV、PRRSV+Rapa、PRRSV+3-MA处理条件下自噬相关基因以及抗原提呈基因的转录水平 | 第47页 |
| 3.3.7 Rapa/3-MA预处理1h后加入PRRSV与Rapa/3-MA与PRRSV同时加入的自噬与抗原提呈基因的变化 | 第47-48页 |
| 3.3.8 Werstern Blot检测P62的表达量 | 第48页 |
| 3.3.9 Werstern Blot检测Rapa、3-Ma处理对PRRSV感染树突状细胞自噬水平的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49页 |
| 3.5 小结 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读学位期间文章发表情况 | 第58-59页 |
