| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-42页 |
| 1.1 手性药物的概况 | 第17-18页 |
| 1.2 L-叔亮氨酸的研究慨况 | 第18-24页 |
| 1.2.1 L-叔亮氨酸的基本性质和应用 | 第18-20页 |
| 1.2.2 L-叔亮氨酸的制备方法 | 第20-23页 |
| 1.2.3 生物催化法合成手性氨基酸的优点 | 第23-24页 |
| 1.3 辅酶再生系统 | 第24-26页 |
| 1.4 甲酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶 | 第26-29页 |
| 1.4.1 甲酸脱氢酶 | 第26-28页 |
| 1.4.2 亮氨酸脱氢酶 | 第28-29页 |
| 1.5 多酶复合体的构建及其意义 | 第29-36页 |
| 1.5.1 多酶复合体自组装及其意义 | 第29-30页 |
| 1.5.2 构建多酶复合体的方法 | 第30-36页 |
| 1.6 合成生物学研究及其在酶表达中的应用 | 第36-39页 |
| 1.7 海洋微生物的氧化还原酶挖掘 | 第39-41页 |
| 1.7.1 开发海洋来源的酶资源的益处 | 第39-40页 |
| 1.7.2 海洋微生物氧化还原酶的挖掘及酶学特性 | 第40-41页 |
| 1.8 本课题的主要研究目的和研究内容 | 第41-42页 |
| 第二章 Alcanivorax dieselolei中嗜冷亮氨酸脱氢酶的性质及其在L-叔亮氨酸生产中的应用 | 第42-60页 |
| 2.1 引言 | 第42-43页 |
| 2.2 实验材料 | 第43-48页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第43页 |
| 2.2.2 主要试剂和缓冲液 | 第43-47页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第47-48页 |
| 2.3 实验方法 | 第48-53页 |
| 2.3.1 提取总DNA | 第48页 |
| 2.3.2 PCR引物设计和扩增 | 第48-49页 |
| 2.3.3 重组蛋白的表达和纯化 | 第49-50页 |
| 2.3.4 酶活测定 | 第50-51页 |
| 2.3.5 AdLeuDH的酶学性质 | 第51-52页 |
| 2.3.6 催化合成L-叔亮氨酸 | 第52-53页 |
| 2.4 结果和讨论 | 第53-58页 |
| 2.4.1 AdLeuDH基因的克隆和重组菌的构建 | 第53-54页 |
| 2.4.2 序列分析和蛋白诱导表达 | 第54-55页 |
| 2.4.3 测定AdLeuDH的酶学性质 | 第55-57页 |
| 2.4.4 检测催化合成L叔亮氨酸的能力 | 第57-58页 |
| 2.5 小结 | 第58-60页 |
| 第三章 可协调多酶协同表达系统的构建及其在L-叔亮氨酸生产中的应用 | 第60-82页 |
| 3.1 引言 | 第60-61页 |
| 3.2 实验材料 | 第61页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第61页 |
| 3.2.2 主要试剂和缓冲液 | 第61页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第61页 |
| 3.3 实验方法 | 第61-68页 |
| 3.3.1 基因序列和生物砖质粒 | 第61-62页 |
| 3.3.2 制备感受态细胞 | 第62-63页 |
| 3.3.3 基因回路的构建 | 第63-66页 |
| 3.3.4 基因回路的表达 | 第66-67页 |
| 3.3.5 酶活与蛋白检测 | 第67页 |
| 3.3.6 基于基因回路生产L-叔亮氨酸 | 第67-68页 |
| 3.4 结果和讨论 | 第68-81页 |
| 3.4.1 基因回路的构建 | 第68-76页 |
| 3.4.2 基因回路的诱导和表达 | 第76-79页 |
| 3.4.3 不同调控回路催化合成L-叔亮氨酸的性能检测 | 第79-81页 |
| 3.5 小结 | 第81-82页 |
| 第四章 甲酸脱氢酶底物和辅酶结合位点的识别和定点突变研究 | 第82-102页 |
| 4.1 引言 | 第82-83页 |
| 4.2 实验材料 | 第83页 |
| 4.3 实验方法 | 第83-91页 |
| 4.3.1 基因序列 | 第83页 |
| 4.3.2 CboFDH的定点突变 | 第83-88页 |
| 4.3.3 结构建模 | 第88页 |
| 4.3.4 突变子的诱导、表达和纯化 | 第88页 |
| 4.3.5 测定突变子和野生型的酶学性质 | 第88-91页 |
| 4.4 结果和讨论 | 第91-100页 |
| 4.4.1 预测和解析CboFDH的活性位点、底物和辅酶结合位点 | 第91-93页 |
| 4.4.2 定点突变及检测 | 第93-95页 |
| 4.4.3 分析CboFDH和突变子的酶学性质 | 第95-96页 |
| 4.4.4 测定CboFDH和突变子的动力学常数 | 第96-100页 |
| 4.5 小结 | 第100-102页 |
| 第五章 基于均匀设计和回归分析提高L-叔亮氨酸的产量 | 第102-113页 |
| 5.1 引言 | 第102-103页 |
| 5.2 实验材料 | 第103页 |
| 5.3 实验方法 | 第103-108页 |
| 5.3.1 工程菌的构建和蛋白表达 | 第103-104页 |
| 5.3.2 酶活测定 | 第104页 |
| 5.3.3 设计实验 | 第104-107页 |
| 5.3.4 L-叔亮氨酸制备 | 第107-108页 |
| 5.4 结果和讨论 | 第108-112页 |
| 5.4.1 CboFDH和LeuDH的表达及酶活检测 | 第108-109页 |
| 5.4.2 设计实验 | 第109页 |
| 5.4.3 数据分析和结果验证 | 第109-112页 |
| 5.5 小结 | 第112-113页 |
| 第六章 结论和展望 | 第113-117页 |
| 6.1 特色、创新点 | 第113-114页 |
| 6.2 结论 | 第114-115页 |
| 6.3 展望 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-133页 |
| 附录Ⅰ | 第133-134页 |
| 附录Ⅱ | 第134-135页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
