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CHO细胞培养过程中单克隆抗体碱性电荷变体的表征与优化

摘要第5-6页
Abstract第6-7页
符号说明第11-12页
第一章 文献综述第12-23页
    1.1 动物细胞培养技术生产抗体概述第12页
    1.2 单克隆抗体药物简介第12-14页
        1.2.1 单克隆抗体的结构及生物学功能第12-13页
        1.2.2 抗体药物的发展第13-14页
    1.3 单克隆抗体的电荷异质性第14-15页
    1.4 影响电荷异质性的常见翻译后修饰第15-20页
        1.4.1 氨基酸位点氧化第16-17页
        1.4.2 赖氨酸变体第17-18页
        1.4.3 脱酰胺第18-19页
        1.4.4 脯氨酸酰胺化第19页
        1.4.5 其他修饰第19-20页
    1.5 细胞培养条件对抗体电荷异质性的影响第20-21页
        1.5.1 工艺参数对电荷变体的影响第20页
        1.5.2 培养基组分对电荷变体的影响第20-21页
    1.6 本文的研究目的、内容及意义第21-23页
第二章 材料与方法第23-29页
    2.1 实验材料第23-24页
        2.1.1 细胞株第23页
        2.1.2 培养基第23页
        2.1.3 实验试剂盒第23页
        2.1.4 实验器材第23-24页
    2.2 细胞培养及胞外孵育实验第24-25页
        2.2.1 细胞复苏及传代第25页
        2.2.2 流加培养第25页
        2.2.3 胞外孵育实验第25页
    2.3 分析方法第25-29页
        2.3.1 细胞密度及活率检测第25页
        2.3.2 氧化还原电位及活性氧检测第25页
        2.3.3 总RNA提取、逆转录PCR及荧光定量PCR第25-26页
        2.3.4 抗体纯化及超滤第26页
        2.3.5 抗体产量检测第26-27页
        2.3.6 电荷变体含量的检测及分离第27页
        2.3.7 肽指纹图谱分析第27页
        2.3.8 N-糖基化修饰检测第27-28页
        2.3.9 聚体及片段化检测第28页
        2.3.10 疏水性检测第28页
        2.3.11 木瓜蛋白酶、过氧化氢及AAPH处理第28页
        2.3.12 统计学分析第28-29页
第三章 单克隆抗体碱性电荷变体的差异表征第29-43页
    3.1 引言第29页
    3.2 实验设计第29-30页
    3.3 结果与讨论第30-41页
        3.3.1 尿苷对细胞生长和抗体表达的影响第30-31页
        3.3.2 尿苷对抗体质量属性的影响第31-34页
        3.3.3 添加尿苷前后碱性电荷变体组成及产生位置确定第34-36页
        3.3.4 液质联用肽指纹图谱分析第36-40页
        3.3.5 甲硫氨酸和色氨酸氧化对电荷变体分布的影响第40-41页
    3.4 本章小结第41-43页
第四章 牛磺酸对单克隆抗体电荷变体的影响第43-52页
    4.1 前言第43-44页
    4.2 实验设计第44页
    4.3 结果与讨论第44-51页
        4.3.1 抗氧化剂对细胞生长及抗体产量的影响第44-46页
        4.3.2 抗氧化剂对单克隆抗体电荷变体的影响第46-47页
        4.3.3 牛磺酸对细胞生长和抗体产量及电荷的影响第47-50页
        4.3.4 牛磺酸对抗体部分质量属性的影响第50-51页
    4.4 本章小结第51-52页
第五章 牛磺酸对碱性变体影响的机制探究第52-61页
    5.1 前言第52页
    5.2 实验设计第52-53页
    5.3 结果与讨论第53-59页
        5.3.1 牛磺酸对细胞生长和抗体表达的影响第53页
        5.3.2 牛磺酸对单克隆抗体电荷的影响第53-54页
        5.3.3 牛磺酸对赖氨酸变体和氨基酸氧化的影响第54-56页
        5.3.4 牛磺酸使赖氨酸变体减少的机制初探第56-57页
        5.3.5 牛磺酸使氧化变体减少的机制初探第57-59页
    5.4 本章小结第59-61页
第六章 全文总结与展望第61-64页
    6.1 全文总结第61-62页
    6.2 展望第62-64页
参考文献第64-73页
致谢第73-74页
研究成果第74页

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