| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 动物细胞培养技术生产抗体概述 | 第12页 |
| 1.2 单克隆抗体药物简介 | 第12-14页 |
| 1.2.1 单克隆抗体的结构及生物学功能 | 第12-13页 |
| 1.2.2 抗体药物的发展 | 第13-14页 |
| 1.3 单克隆抗体的电荷异质性 | 第14-15页 |
| 1.4 影响电荷异质性的常见翻译后修饰 | 第15-20页 |
| 1.4.1 氨基酸位点氧化 | 第16-17页 |
| 1.4.2 赖氨酸变体 | 第17-18页 |
| 1.4.3 脱酰胺 | 第18-19页 |
| 1.4.4 脯氨酸酰胺化 | 第19页 |
| 1.4.5 其他修饰 | 第19-20页 |
| 1.5 细胞培养条件对抗体电荷异质性的影响 | 第20-21页 |
| 1.5.1 工艺参数对电荷变体的影响 | 第20页 |
| 1.5.2 培养基组分对电荷变体的影响 | 第20-21页 |
| 1.6 本文的研究目的、内容及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23页 |
| 2.1.3 实验试剂盒 | 第23页 |
| 2.1.4 实验器材 | 第23-24页 |
| 2.2 细胞培养及胞外孵育实验 | 第24-25页 |
| 2.2.1 细胞复苏及传代 | 第25页 |
| 2.2.2 流加培养 | 第25页 |
| 2.2.3 胞外孵育实验 | 第25页 |
| 2.3 分析方法 | 第25-29页 |
| 2.3.1 细胞密度及活率检测 | 第25页 |
| 2.3.2 氧化还原电位及活性氧检测 | 第25页 |
| 2.3.3 总RNA提取、逆转录PCR及荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 2.3.4 抗体纯化及超滤 | 第26页 |
| 2.3.5 抗体产量检测 | 第26-27页 |
| 2.3.6 电荷变体含量的检测及分离 | 第27页 |
| 2.3.7 肽指纹图谱分析 | 第27页 |
| 2.3.8 N-糖基化修饰检测 | 第27-28页 |
| 2.3.9 聚体及片段化检测 | 第28页 |
| 2.3.10 疏水性检测 | 第28页 |
| 2.3.11 木瓜蛋白酶、过氧化氢及AAPH处理 | 第28页 |
| 2.3.12 统计学分析 | 第28-29页 |
| 第三章 单克隆抗体碱性电荷变体的差异表征 | 第29-43页 |
| 3.1 引言 | 第29页 |
| 3.2 实验设计 | 第29-30页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第30-41页 |
| 3.3.1 尿苷对细胞生长和抗体表达的影响 | 第30-31页 |
| 3.3.2 尿苷对抗体质量属性的影响 | 第31-34页 |
| 3.3.3 添加尿苷前后碱性电荷变体组成及产生位置确定 | 第34-36页 |
| 3.3.4 液质联用肽指纹图谱分析 | 第36-40页 |
| 3.3.5 甲硫氨酸和色氨酸氧化对电荷变体分布的影响 | 第40-41页 |
| 3.4 本章小结 | 第41-43页 |
| 第四章 牛磺酸对单克隆抗体电荷变体的影响 | 第43-52页 |
| 4.1 前言 | 第43-44页 |
| 4.2 实验设计 | 第44页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第44-51页 |
| 4.3.1 抗氧化剂对细胞生长及抗体产量的影响 | 第44-46页 |
| 4.3.2 抗氧化剂对单克隆抗体电荷变体的影响 | 第46-47页 |
| 4.3.3 牛磺酸对细胞生长和抗体产量及电荷的影响 | 第47-50页 |
| 4.3.4 牛磺酸对抗体部分质量属性的影响 | 第50-51页 |
| 4.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第五章 牛磺酸对碱性变体影响的机制探究 | 第52-61页 |
| 5.1 前言 | 第52页 |
| 5.2 实验设计 | 第52-53页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第53-59页 |
| 5.3.1 牛磺酸对细胞生长和抗体表达的影响 | 第53页 |
| 5.3.2 牛磺酸对单克隆抗体电荷的影响 | 第53-54页 |
| 5.3.3 牛磺酸对赖氨酸变体和氨基酸氧化的影响 | 第54-56页 |
| 5.3.4 牛磺酸使赖氨酸变体减少的机制初探 | 第56-57页 |
| 5.3.5 牛磺酸使氧化变体减少的机制初探 | 第57-59页 |
| 5.4 本章小结 | 第59-61页 |
| 第六章 全文总结与展望 | 第61-64页 |
| 6.1 全文总结 | 第61-62页 |
| 6.2 展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 研究成果 | 第74页 |
