| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 程序性细胞坏死概述 | 第12-13页 |
| 1.2 肿瘤坏死因子(TNF)简介 | 第13-15页 |
| 1.3 TNF诱导的程序性细胞死亡的分子机制 | 第15-17页 |
| 1.4 受体相互作用蛋白1(RIP1) | 第17-19页 |
| 1.4.1 RIP1的结构 | 第17-18页 |
| 1.4.2 RIP1与程序性细胞坏死 | 第18-19页 |
| 1.5 活性氧簇(ROS)与程序性细胞坏死 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 细胞实验相关材料 | 第21页 |
| 2.1.2 分子克隆相关试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 蛋白质实验相关试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-41页 |
| 2.3.1 分子克隆相关实验方法 | 第23-31页 |
| 2.3.1.1 质粒表达载体pBOBI | 第23-24页 |
| 2.3.1.2 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.3.1.3 聚合酶链式反应(PCR) | 第25页 |
| 2.3.1.4 点突变PCR操作过程 | 第25-26页 |
| 2.3.1.5 DNA片段的回收与纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.1.6 限制性内切酶消化表达载体 | 第27页 |
| 2.3.1.7 连接酶非依赖克隆 Ligase Independent Clone (L 1C) | 第27-28页 |
| 2.3.1.8 大肠杆蔺Turbo感受态制备 | 第28-29页 |
| 2.3.1.9 小量提取质粒DNA(STET煮沸法) | 第29-30页 |
| 2.3.1.10 中量提取质粒DNA(碱裂解法) | 第30-31页 |
| 2.3.2 细胞实验相关实验方法 | 第31-36页 |
| 2.3.2.1 细胞培养液的配制 | 第31-32页 |
| 2.3.2.2 细胞的培养与传代 | 第32-33页 |
| 2.3.2.3 磷酸钙转染法转染细胞 | 第33页 |
| 2.3.2.4 慢病毒包装 | 第33-34页 |
| 2.3.2.5 病毒感染目的细胞 | 第34页 |
| 2.3.2.6 细胞存活率分析 | 第34-35页 |
| 2.3.2.7 细胞内活性氧的测定 | 第35-36页 |
| 2.3.3 蛋白质实验相关实验方法 | 第36-41页 |
| 2.3.3.1 蛋白质样品的制备 | 第36页 |
| 2.3.3.2 普通蛋白质电泳 | 第36-37页 |
| 2.3.3.3 非还原型蛋白质电泳 | 第37-38页 |
| 2.3.3.4 蛋白质免疫印迹(Western Blot) | 第38页 |
| 2.3.3.5 免疫沉淀 | 第38-40页 |
| 2.3.3.6 质谱样品的制备 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第41-55页 |
| 3.1 线粒体产生的ROS能够促进L929的程序性坏死 | 第41-43页 |
| 3.1.1 ROS参与TNF诱导的L929细胞程序性坏死 | 第41-42页 |
| 3.1.2 线粒体缺失能够有效抑制程序性细胞坏死 | 第42-43页 |
| 3.2 ROS在细胞坏死中的作用位点在RIP1下游或RIP3上游 | 第43-45页 |
| 3.3 程序性细胞坏死中RIP1蛋白上有三个功能性半胱氨酸 | 第45-52页 |
| 3.3.1 细胞坏死过程中RIP1蛋白能够被ROS氧化 | 第45-46页 |
| 3.3.2 细胞坏死过程中RIP1蛋白中的半胱氨酸能够被ROS氧化 | 第46-47页 |
| 3.3.3 细胞坏死过程中RIP1蛋白上的三个半胱氨酸能够被ROS氧化 | 第47-52页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第52-55页 |
| 附录1 图表索引 | 第55-56页 |
| 附录2 缩略语及中英文对照 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
