| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 缩略词 | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第10-19页 |
| 1.1.1 PRRSV病原学 | 第10-15页 |
| 1.1.2 PRRSV诊断方法的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.3 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-34页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 检测样品 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株、毒株、单抗及载体 | 第19页 |
| 2.1.3 细胞及细胞培养基 | 第19页 |
| 2.1.4 酶类及相关试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.5 主要仪器和设备 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-34页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第21-22页 |
| 2.2.2 ORF5及NSP2基因扩增和测序 | 第22-24页 |
| 2.2.3 病毒分离与鉴定 | 第24页 |
| 2.2.4 间接免疫荧光检测（IFA）鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.5 分离病毒的全基因组测序 | 第25-27页 |
| 2.2.6 PRRSV Nsp10蛋白原核表达载体的构建 | 第27-30页 |
| 2.2.7 重组蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第30-32页 |
| 2.2.8 PRRSV Nsp10-ELISA检测方法的初步建立 | 第32-34页 |
| 2.2.9 PRRSV Nsp10-ELISA检测方法的特异性试验 | 第34页 |
| 2.2.10 与商业化试剂盒对比 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-48页 |
| 3.1 病毒分离及鉴定结果 | 第34-37页 |
| 3.1.1 临床样本的剖检 | 第34-35页 |
| 3.1.2 病料RT-PCR检测结果 | 第35-36页 |
| 3.1.3 病毒的分离鉴定 | 第36页 |
| 3.1.4 IFA检测结果 | 第36页 |
| 3.1.5 分离病毒全基因组的扩增结果 | 第36-37页 |
| 3.2 全基因组序列的测定与分析 | 第37-39页 |
| 3.3 PRRSV分离株GP5氨基酸位点分析 | 第39-40页 |
| 3.4 目的基因Nsp10的扩增 | 第40-41页 |
| 3.5 重组质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| 3.6 重组质粒的表达 | 第41-42页 |
| 3.7 重组蛋白的可溶性分析及纯化 | 第42-43页 |
| 3.8 重组蛋白的Western-blot鉴定 | 第43页 |
| 3.9 PRRSV ELISA检测方法工作条件的确定 | 第43-48页 |
| 3.9.1 抗原、抗体最佳稀释度的确定 | 第43-44页 |
| 3.9.2 封闭条件的确定 | 第44-45页 |
| 3.9.3 血清作用时间的确定 | 第45-46页 |
| 3.9.4 酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第46页 |
| 3.9.5 底物显色时间的确定 | 第46页 |
| 3.9.6 阴、阳性临界值的确定 | 第46-47页 |
| 3.9.7 PRRSV ELIS A检测方法的重复性试验结果 | 第47-48页 |
| 3.9.8 与商业化试剂盒检测结果对比 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-53页 |
| 4.1 PRRSV病毒的分离鉴定 | 第48-49页 |
| 4.2 分离病毒的全基因组序列分析以及Nsp2、ORF5基因进化关系分析 | 第49-50页 |
| 4.3 PRRSV NSP10蛋白的原核表达 | 第50页 |
| 4.4 重组蛋白的存在形式和纯化 | 第50-51页 |
| 4.5 ELISA检测方法的建立 | 第51-53页 |
| 全文总结 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第62页 |
