| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 表观遗传学 | 第12页 |
| 1.2 TET蛋白 | 第12-13页 |
| 1.3 TET与肿瘤的关系 | 第13-15页 |
| 1.4 TET基因突变 | 第15-17页 |
| 1.5 食管癌的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.6 课题研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第2章 TET1、2、3突变体的筛选 | 第20-40页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.2.1 仪器设备 | 第20页 |
| 2.2.2 试剂及耗材 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.3.1 组织内提取DNA | 第21-22页 |
| 2.3.2 细胞内提取DNA | 第22页 |
| 2.3.3 细胞内提取RNA | 第22-23页 |
| 2.3.4 Q5高保真酶PCR | 第23-24页 |
| 2.3.5 切胶回收目的基因产物 | 第24页 |
| 2.4 实验结果 | 第24-37页 |
| 2.4.1 食管癌和癌旁组织DNA的提取和TET1、2、3编码区扩增引物的设计 | 第24-28页 |
| 2.4.2 TET1、2、3编码区的扩增与测序 | 第28-34页 |
| 2.4.3 食管癌细胞中突变位点的筛选 | 第34-35页 |
| 2.4.4 TET基因在食管癌中的突变率分析 | 第35-36页 |
| 2.4.5 TET突变位点位置分析 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-40页 |
| 第3章 TET1、2、3在食管癌中的表达检测 | 第40-48页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2.1 仪器设备 | 第40页 |
| 3.2.2 试剂及耗材 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.3.1 组织内提取RNA | 第41页 |
| 3.3.2 RT-PCR | 第41-43页 |
| 3.4 实验结果 | 第43-46页 |
| 3.4.1 组织RNA的提取和TET1、2、3RT-PCR扩增引物的设计 | 第43页 |
| 3.4.2 分析TET1、2、3在食管癌及癌旁组织中的表达 | 第43-44页 |
| 3.4.3 分析TET1、2、3在食管癌细胞及正常食管细胞中的表达 | 第44-45页 |
| 3.4.4 TET1在食管癌中的临床数据分析 | 第45-46页 |
| 3.5 本章小结 | 第46-48页 |
| 第4章 TET1突变位点鉴定 | 第48-72页 |
| 4.1 引言 | 第48-49页 |
| 4.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 仪器设备 | 第49页 |
| 4.2.2 试剂及耗材 | 第49-50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50-59页 |
| 4.3.1 突变体质粒构建 | 第50-51页 |
| 4.3.2 LB培养基的配制 | 第51页 |
| 4.3.3 大肠杆菌热击转化 | 第51-52页 |
| 4.3.4 无内毒素质粒大提 | 第52-53页 |
| 4.3.5 细胞复苏 | 第53-54页 |
| 4.3.6 细胞传代 | 第54页 |
| 4.3.7 Chemifect细胞转染 | 第54页 |
| 4.3.8 细胞内提取蛋白 | 第54-55页 |
| 4.3.9 蛋白定量(BCA法定量) | 第55页 |
| 4.3.10 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第55-57页 |
| 4.3.11 DNA dotblot | 第57页 |
| 4.3.12 MTT细胞增殖实验 | 第57-58页 |
| 4.3.13 细胞划痕实验 | 第58页 |
| 4.3.14 Transwell | 第58-59页 |
| 4.4 实验结果 | 第59-69页 |
| 4.4.1 突变型TET1质粒的构建 | 第59-60页 |
| 4.4.2 TET1突变体羟甲基化和蛋白表达功能的鉴定 | 第60-64页 |
| 4.4.3 TET1突变体对EC109细胞功能的影响 | 第64-67页 |
| 4.4.4 TET1突变体影响EC109细胞功能的可能性机制探讨 | 第67-69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-72页 |
| 结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的学术论文 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
