| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词 | 第11-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-24页 |
| 1.1 MircoRNA概述 | 第15页 |
| 1.2 滚环扩增技术 | 第15-17页 |
| 1.2.1 滚环扩增技术简介 | 第15-16页 |
| 1.2.2 滚环扩增原理 | 第16-17页 |
| 1.2.3 滚环扩增特点及优势 | 第17页 |
| 1.3 实时荧光PCR | 第17-22页 |
| 1.3.1 实时荧光PCR | 第17-19页 |
| 1.3.2 SYBRGreenI荧光染料PCR | 第19-20页 |
| 1.3.3 茎环引物RT-PCR | 第20-22页 |
| 1.4 课题设计及研究意义 | 第22-24页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第22-23页 |
| 1.4.2 研究内容及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 茎环引物RT-PCR检测miR-200a-3p | 第24-37页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.2.1 miR-200家族 | 第24页 |
| 2.2.2 引物与探针 | 第24-25页 |
| 2.3 实验部分 | 第25-29页 |
| 2.3.1 实验仪器 | 第25页 |
| 2.3.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.3.3 实验相关试剂的配制 | 第26页 |
| 2.3.4 细胞中RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.3.5 miR-200a-3p的茎环引物RT-PCR检测方法的建立 | 第27-28页 |
| 2.3.6 实验条件的优化 | 第28-29页 |
| 2.3.7 标准曲线及定量下限 | 第29页 |
| 2.3.8 灵敏度实验 | 第29页 |
| 2.3.9 实际样本的检测 | 第29页 |
| 2.3.10 数据的处理与分析 | 第29页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第29-36页 |
| 2.4.1 RTprimer分析 | 第29-30页 |
| 2.4.2 PCR上游引物分析 | 第30-31页 |
| 2.4.3 PCR下游引物分析 | 第31-32页 |
| 2.4.4 Tm值的分析 | 第32-33页 |
| 2.4.5 标准曲线及定量下限 | 第33-34页 |
| 2.4.6 灵敏度分析 | 第34页 |
| 2.4.7 样本检测结果分析 | 第34-36页 |
| 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 RCA-PCR检测miR-200a-3p方法的建立及其应用研究 | 第37-58页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 引物的设计与合成 | 第37-38页 |
| 3.2.1 miR-200家族 | 第37页 |
| 3.2.2 引物与探针 | 第37-38页 |
| 3.3 实验部分 | 第38-45页 |
| 3.3.1 实验仪器 | 第38页 |
| 3.3.2 实验试剂 | 第38-39页 |
| 3.3.3 实验相关试剂的配制 | 第39页 |
| 3.3.4 细胞中RNA的提取 | 第39页 |
| 3.3.5 miR-200a-3p的RCA-PCR检测方法的建立 | 第39-41页 |
| 3.3.6 实验条件的优化 | 第41-43页 |
| 3.3.7 标准曲线及定量下限 | 第43-44页 |
| 3.3.8 灵敏度实验 | 第44页 |
| 3.3.9 精密度实验 | 第44页 |
| 3.3.10 生物基质的干扰考察 | 第44页 |
| 3.3.11 特异性实验 | 第44页 |
| 3.3.12 实际样本的检测 | 第44页 |
| 3.3.13 数据处理和分析 | 第44-45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-57页 |
| 3.4.1 Tm值分析 | 第45-46页 |
| 3.4.2 RCT分析 | 第46页 |
| 3.4.3 T4酶的量分析 | 第46-47页 |
| 3.4.4 phi29酶的量分析 | 第47-48页 |
| 3.4.5 下游引物分析 | 第48-49页 |
| 3.4.6 上游引物浓度分析 | 第49-50页 |
| 3.4.7 下游引物浓度分析 | 第50-51页 |
| 3.4.8 标准曲线和定量下限 | 第51-52页 |
| 3.4.9 灵敏度分析 | 第52页 |
| 3.4.10 精密度分析 | 第52-53页 |
| 3.4.11 生物基质的干扰考察 | 第53-54页 |
| 3.4.12 特异性分析 | 第54-55页 |
| 3.4.13 样本检测结果分析 | 第55-57页 |
| 本章小结 | 第57-58页 |
| 总结与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
