| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 水稻白叶枯病菌 | 第11-12页 |
| 1.1.1 水稻白叶枯病菌 | 第11-12页 |
| 1.1.2 水稻白叶枯病菌基因组 | 第12页 |
| 1.2 水稻白叶枯病致病机制 | 第12-18页 |
| 1.2.1 致病侵染过程 | 第12-13页 |
| 1.2.2 致病因子 | 第13页 |
| 1.2.3 Ⅲ型分泌系统 | 第13-15页 |
| 1.2.4 Ⅲ型效应物(T3SEs) | 第15-18页 |
| 1.3 植物病原菌-植物寄主互作机制 | 第18-21页 |
| 1.3.1 植物病原菌-植物寄主互作的遗传基础 | 第18-19页 |
| 1.3.2 植物的天然免疫 | 第19-21页 |
| 1.3.3 基于LRR结构的蛋白互作 | 第21页 |
| 1.4 酵母双杂交 | 第21-24页 |
| 1.4.1 酵母双杂交的原理 | 第21-23页 |
| 1.4.2 酵母双杂交的运用与优缺点 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的内容口的、内容和意义 | 第24-26页 |
| 1.5.1 本研究的内容目的 | 第24-25页 |
| 1.5.2 本研究的内容内容 | 第25页 |
| 1.5.3 本研究的内容意义 | 第25-26页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第26-49页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 2.2 实验所用植物与培养 | 第27页 |
| 2.3 实验所用培养基的配置条件 | 第27-29页 |
| 2.3.1 酵母菌株培养基 | 第27-28页 |
| 2.3.2 水稻白叶枯病菌培养基 | 第28页 |
| 2.3.3 大肠杆菌培养基 | 第28-29页 |
| 2.4 本实验使用菌株保存与活化 | 第29页 |
| 2.5. 本实验所用抗生素及浓度配置 | 第29页 |
| 2.6 本实验所用的缓冲液配置及保存 | 第29-31页 |
| 2.7 DNA的扩增 | 第31-33页 |
| 2.7.1 引物设计 | 第31页 |
| 2.7.2 DNA片段的PCR扩增反应与体系 | 第31-33页 |
| 2.8 DNA的基础操作 | 第33-34页 |
| 2.8.1 DNA的琼脂糖电泳和染色 | 第33页 |
| 2.8.2 DNA纯化 | 第33页 |
| 2.8.3 DNA酶切 | 第33-34页 |
| 2.8.4 DNA连接实验 | 第34页 |
| 2.9 DNA的化学转化与阳性克隆的验证实验方法 | 第34-36页 |
| 2.9.1 大肠杆菌DH5α感受态的制备和转化(CaCl_2化转法) | 第34-35页 |
| 2.9.2 质粒DNA的提取方法 | 第35页 |
| 2.9.3 阳性克隆验证方法 | 第35-36页 |
| 2.9.4 阳性克隆送测序 | 第36页 |
| 2.10 三亲本接合 | 第36-37页 |
| 2.11 缺失突变 | 第37页 |
| 2.11.1 缺失突变体的构建 | 第37页 |
| 2.11.2 缺失突变体的互补 | 第37页 |
| 2.12 突变体表型检测与致病性检测 | 第37-40页 |
| 2.12.1 胞外蛋白酶检测 | 第37-38页 |
| 2.12.2 纤维素酶检测 | 第38页 |
| 2.12.3 淀粉酶检测 | 第38页 |
| 2.12.4 胞外多糖检测 | 第38页 |
| 2.12.5 HR检测 | 第38-39页 |
| 2.12.6 游动性检测 | 第39页 |
| 2.12.7 致病力检测 | 第39-40页 |
| 2.13 效应物诱饵的构建 | 第40-42页 |
| 2.13.1 水稻白叶枯病菌基因组DNA提取方法 | 第40页 |
| 2.13.2 效应物基因与BD载体的重组克隆 | 第40页 |
| 2.13.3 LiAc法酵母菌感受态的小量制备与转化 | 第40-41页 |
| 2.13.4 诱饵菌株的阳性克隆验证 | 第41-42页 |
| 2.13.5 诱饵的自激活与毒性检测 | 第42页 |
| 2.14 水稻cDNA文库的构建 | 第42-46页 |
| 2.14.1 总RNA的提取方法 | 第42-43页 |
| 2.14.2 mRNA的分离与纯化 | 第43-44页 |
| 2.14.3 mRNA反转录成为ss cDNA与ds cDNA | 第44-45页 |
| 2.14.4 ds cDNA的纯化 | 第45页 |
| 2.14.5 构建日本晴水稻cDNA文库 | 第45-46页 |
| 2.15 酵母双杂交 | 第46-48页 |
| 2.15.1 酵母双杂交实验 | 第46-47页 |
| 2.15.2 杂交结果的阳性克隆验证与一对一实验 | 第47页 |
| 2.15.3 杂交结果的β-半乳糖苷酶活性检测 | 第47-48页 |
| 2.16 生物信息学分析方法 | 第48-49页 |
| 2.16.1 杂交结果测序送样标准 | 第48页 |
| 2.16.2 生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-79页 |
| 3.1 预测效应物PXO_03420基因信息 | 第49-51页 |
| 3.1.1 PXO_03420基因 | 第49-50页 |
| 3.1.2 预测效应物PXO_03420基因的同源进化树分析 | 第50-51页 |
| 3.2 PXO_03420基因缺失突变体的构建 | 第51-55页 |
| 3.2.1 缺失基因的左右外源片段扩增 | 第51-53页 |
| 3.2.2 左右缺失片段连接到pK18sacB载体上 | 第53页 |
| 3.2.3 将pKsacB03420中间体三亲导入PX099~A中 | 第53-55页 |
| 3.3 互补实验 | 第55-59页 |
| 3.3.1 PCR扩增互补外源片段 | 第55-56页 |
| 3.3.2 将互补外源片段与pLARF3载体连接 | 第56-57页 |
| 3.3.3 三亲接合实验与验证 | 第57-59页 |
| 3.4 突变体与互补菌的表型检测与致病性检测结果与分析 | 第59-64页 |
| 3.4.1 表型板检测 | 第59-60页 |
| 3.4.2 HR检测 | 第60-61页 |
| 3.4.3 游动性检测 | 第61-62页 |
| 3.4.4 致病力检测 | 第62-64页 |
| 3.5 酵母双杂交所用诱饵Y187/pGBKT7_03420的构建分析 | 第64-68页 |
| 3.5.1 重组载体的构建 | 第64-66页 |
| 3.5.2 诱饵的自激活检测与毒性检测 | 第66-68页 |
| 3.6 日本晴水稻cDNA文库的构建 | 第68-72页 |
| 3.6.1 总RNA与mRNA质量分析 | 第68-69页 |
| 3.6.2 双链cDNA的质量分析 | 第69-72页 |
| 3.7 酵母双杂交结果分析 | 第72-79页 |
| 3.7.1 酵母双杂交初筛 | 第72-73页 |
| 3.7.2 一对一回交实验 | 第73-74页 |
| 3.7.3 杂交结果的p-半乳糖苷酶活性检测 | 第74-75页 |
| 3.7.4 阳性结果测序分析 | 第75-76页 |
| 3.7.5 P7生物信息学分析 | 第76-77页 |
| 3.7.6 P15生物信息学分析 | 第77-79页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第79-82页 |
| 4.1 关于PXO_03420基因LRR结构域 | 第79页 |
| 4.2 关于PXO_03420的突变 | 第79-80页 |
| 4.3 关于酵母双杂交作用结果与展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第92页 |
