| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| 1.1 默诺霉素研究进展 | 第14-23页 |
| 1.1.1 默诺霉素概述 | 第14-15页 |
| 1.1.2 默诺霉素抑菌机理 | 第15-16页 |
| 1.1.3 默诺霉素的生物合成 | 第16-21页 |
| 1.1.4 默诺霉素生物合成调控 | 第21-22页 |
| 1.1.5 默诺霉素结构和生物学活性之间的关系 | 第22-23页 |
| 1.2 基因组文库及大片段克隆载体概述 | 第23-25页 |
| 1.2.1 基因组文库概述 | 第23-24页 |
| 1.2.2 大片段克隆载体研究进展 | 第24-25页 |
| 1.2.3 Fosmid文库概述 | 第25页 |
| 1.3 选题意义、技术路线 | 第25-27页 |
| 1.3.1 选题意义 | 第25-26页 |
| 1.3.2 技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 班堡链霉菌默诺霉素基因组文库的构建 | 第27-47页 |
| 2.1 前言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-31页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第27-28页 |
| 2.2.2 仪器与设备 | 第28页 |
| 2.2.3 药品与试剂 | 第28-30页 |
| 2.2.4 分子量标记 | 第30页 |
| 2.2.5 各种氨基酸和试验用酶 | 第30页 |
| 2.2.6 试剂盒 | 第30-31页 |
| 2.2.7 主要培养基 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-37页 |
| 2.3.1 菌体培养方法 | 第31页 |
| 2.3.2 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.3 链霉菌全基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.4 插入序列的随机剪切 | 第33页 |
| 2.3.5 插入序列的大小测定 | 第33页 |
| 2.3.6 插入序列的末端修复 | 第33-34页 |
| 2.3.7 末端修复序列的分离 | 第34页 |
| 2.3.8 回收目的序列片段 | 第34-35页 |
| 2.3.9 载体与目的片段连接反应 | 第35页 |
| 2.3.10 体外包装 | 第35页 |
| 2.3.11 重组噬菌体的转染 | 第35-36页 |
| 2.3.12 包装噬菌体的滴度测定 | 第36页 |
| 2.3.13 质粒文库的扩增和保存 | 第36页 |
| 2.3.14 文库质量的检测 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-45页 |
| 2.4.1 高质量班堡链霉菌全基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.4.2 插入片段的剪切 | 第38-39页 |
| 2.4.3 插入序列末端修复的分离 | 第39-40页 |
| 2.4.4 目的片段的回收 | 第40-41页 |
| 2.4.5 载体与基因组DNA的连接、包装和转染 | 第41-42页 |
| 2.4.6 包装噬菌体的滴度测定 | 第42-43页 |
| 2.4.7 文库质量的检测 | 第43-45页 |
| 2.4.8 质粒文库的扩增和保存 | 第45页 |
| 2.5 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 班堡链霉菌默诺霉素基因组文库筛选及生物合成基因簇的序列分析 | 第47-72页 |
| 3.1 前言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-50页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第47-48页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第48页 |
| 3.2.3 试剂及溶液 | 第48页 |
| 3.2.4 主要培养基 | 第48页 |
| 3.2.5 各种药品和试验用酶 | 第48-49页 |
| 3.2.6 分子量标记 | 第49页 |
| 3.2.7 试剂盒 | 第49页 |
| 3.2.8 PCR引物 | 第49页 |
| 3.2.9 抗生素 | 第49-50页 |
| 3.3 实验方法 | 第50-55页 |
| 3.3.1 链霉菌菌株培养 | 第50页 |
| 3.3.2 链霉菌总DNA的小量提取 | 第50页 |
| 3.3.3 PCR扩增M5基因 | 第50-51页 |
| 3.3.4 DNA片段凝胶回收 | 第51-52页 |
| 3.3.5 M5片段与载体的连接 | 第52-53页 |
| 3.3.6 大肠杆菌CaCl_2法制备感受态细胞及DNA转化 | 第53页 |
| 3.3.7 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第53-54页 |
| 3.3.8 以各板混合质粒DNA为模板PCR扩增M5基因 | 第54页 |
| 3.3.9 以阳性板各行混合质粒为模板PCR扩增M5基因 | 第54页 |
| 3.3.10 以阳性行各质粒为模板PCR扩增M5基因 | 第54页 |
| 3.3.11 目的克隆的筛选与验证 | 第54-55页 |
| 3.3.12 默诺霉素生物合成基因簇的序列分析 | 第55页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第55-70页 |
| 3.4.1 探针的获得 | 第55-57页 |
| 3.4.2 PCR技术递缩基因组文库筛选阳性克隆 | 第57-64页 |
| 3.4.3 阳性克隆子的验证 | 第64-66页 |
| 3.4.4 序列分析 | 第66-70页 |
| 3.5 讨论 | 第70-71页 |
| 3.6 本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 总结与展望 | 第72-74页 |
| 4.1 总结 | 第72-73页 |
| 4.1.1 班堡链霉菌基因组DNA的制备 | 第72页 |
| 4.1.2 插入片段的处理 | 第72页 |
| 4.1.3 基因组文库质量的测量 | 第72-73页 |
| 4.1.4 默诺霉素生物合成基因簇的克隆 | 第73页 |
| 4.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录 | 第78-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 攻读硕士学位期间主要科研成果 | 第95页 |
