| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-22页 |
| 1.1 双孢蘑菇研究现状和存在问题 | 第9-10页 |
| 1.2 ACC脱氨酶 | 第10-14页 |
| 1.2.1 ACC脱氨酶的生化特征 | 第10-11页 |
| 1.2.2 ACC脱氨酶蛋白质结构 | 第11-12页 |
| 1.2.3 ACC脱氨酶的作用机理 | 第12-13页 |
| 1.2.4 ACC脱氨酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.3 食用菌遗传转化研究进展 | 第14-20页 |
| 1.3.1 PEG介导的原生质体转化法 | 第15页 |
| 1.3.2 电激转化法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 基因枪法 | 第16页 |
| 1.3.4 限制性内切酶介导的DNA整合法 | 第16-17页 |
| 1.3.5 农杆菌介导转化法 | 第17-20页 |
| 1.4 选题依据和研究内容 | 第20-22页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第20-21页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第21页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 ACC脱氨酶基因表达载体的构建 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌种 | 第22页 |
| 2.1.2 载体 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.4 培养基 | 第22页 |
| 2.1.5 生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.6 质粒提取缓冲液 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 acds片段获取 | 第23-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-33页 |
| 2.3.1 目的基因获取 | 第30页 |
| 2.3.2 克隆载体的PCR检测 | 第30-31页 |
| 2.3.3 克隆载体测序结果 | 第31-32页 |
| 2.3.4 重组载体PBHG-acdS的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 ACC表达载体转化双孢蘑菇AS2796 | 第34-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 供试菌株与质粒 | 第34页 |
| 3.1.2 生化试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第34页 |
| 3.1.3 培养基 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 抗菌素抗性测定方法 | 第35页 |
| 3.2.2 质粒转化农杆菌 | 第35-37页 |
| 3.2.3 外源基因转化双孢蘑菇AS2796 | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.3.1 抗药标记筛选 | 第37-38页 |
| 3.3.2 重组质粒PBGH-acds转化农杆菌EHA105 | 第38-39页 |
| 3.3.3 转化双孢蘑菇AS2796 | 第39-41页 |
| 第四章 双胞蘑菇转化子验证 | 第41-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 供试菌株和质粒 | 第41页 |
| 4.1.2 试剂 | 第41页 |
| 4.1.3 PDA培养基 | 第41页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第41-42页 |
| 4.2 试验方法 | 第42-46页 |
| 4.2.1 高浓度潮霉素抗性验证 | 第42页 |
| 4.2.2 双孢蘑菇基因组提取 | 第42页 |
| 4.2.3 重组子的PCR验证 | 第42-43页 |
| 4.2.4 ACC脱氨酶酶活测定 | 第43-44页 |
| 4.2.5 RT-PCR | 第44-45页 |
| 4.2.6 菌丝生长速度测定 | 第45页 |
| 4.2.7 乙烯含量的测定 | 第45-46页 |
| 4.2.8 双孢蘑菇出菇 | 第46页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第46-52页 |
| 4.3.1 潮霉素验证结果 | 第46-47页 |
| 4.3.2 基因组PCR验证 | 第47-48页 |
| 4.3.3 ACC脱氨酶酶活测定 | 第48-49页 |
| 4.3.4 菌丝生长速度测定 | 第49页 |
| 4.3.5 RT-PCR分析验证 | 第49-51页 |
| 4.3.6 乙烯含量 | 第51页 |
| 4.3.7 出菇实验 | 第51-52页 |
| 4.4 本章小结 | 第52-54页 |
| 第五章 结果和讨论 | 第54-56页 |
| 5.1 结论 | 第54页 |
| 5.2 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| ABSTRACT | 第63-64页 |