| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-16页 |
| 第一部分：布鲁斯菌BvrR基因原核表达载体的构建及BvrR蛋白的鉴定与纯化 | 第16-38页 |
| 1 前言 | 第16-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-28页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 pET28a-BvrR载体的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.2 重组质粒pET28a-BvrR在大肠杆菌中的诱导表达 | 第25页 |
| 2.2.3 表达产物的SDS-PAGE电泳分析 | 第25页 |
| 2.2.4 原核表达产物免疫印迹(Western blotting)检测 | 第25-26页 |
| 2.2.5 BvrR融合蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.6 纯化的BvrR蛋白与布鲁斯菌多克隆抗体免疫反应性的检测.. | 第27页 |
| 2.2.7 布鲁斯菌BvrR蛋白多克隆抗体的制备 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-34页 |
| 3.1 布鲁斯菌BvrR基因的PCR扩增 | 第28页 |
| 3.2 原核表达载体pET28a-BvrR双酶切及PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3 原核表达载体pET28a-BvrR序列测定 | 第29-31页 |
| 3.4 BvrR融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达及鉴定 | 第31页 |
| 3.5 western blotting检测BvrR融合蛋白 | 第31-32页 |
| 3.6 纯化的BvrR蛋白与布鲁斯菌多克隆抗体免疫反应性检测 | 第32-34页 |
| 4 讨论 | 第34-37页 |
| 5 结论 | 第37-38页 |
| 第二部分：布鲁斯菌BvrR基因真核表达载体的构建及体外表达 | 第38-54页 |
| 1 前言 | 第38-40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-45页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第40-41页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第40页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第40-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 2.2.1 pcDNA-BvrR载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.2 pcDNA-BvrR转染Vero细胞 | 第42页 |
| 2.2.3 pcDNA-BvrR真核表达产物的检测 | 第42-45页 |
| 3 结果 | 第45-49页 |
| 3.1 真核重组表达载体pcDNA-BvrR双酶切及PCR鉴定 | 第45页 |
| 3.2 真核重组表达载体pcDNA-BvrR转染Vero细胞效果检测 | 第45-49页 |
| 3.2.1 RT-PCR方法检测细胞中真核重组表达载体pcDNA-BvrR基因的表达 | 第45-46页 |
| 3.2.2 免疫印迹检测(Western blotting)转染重组质粒表达产物 | 第46-47页 |
| 3.2.3 间接免疫荧光检测转染重组质粒表达产物 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 第三部分：布鲁斯菌BvrR核酸疫苗免疫效果的研究 | 第54-77页 |
| 1 前言 | 第54-55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-60页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第55-56页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第55页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第55-56页 |
| 2.2 实验方法 | 第56-60页 |
| 2.2.1 质粒的制备与大量提取 | 第56页 |
| 2.2.2 试验动物分组及免疫程序 | 第56页 |
| 2.2.3 ELISA检测小鼠血清中抗BvrR-IgG抗体含量 | 第56-57页 |
| 2.2.4 ELISA检测小鼠血清中IFN-g,IL-4含量 | 第57页 |
| 2.2.5 小鼠T细胞亚类计数(CD4+、CD8+) | 第57页 |
| 2.2.6 小鼠淋巴细胞转化实验 | 第57-58页 |
| 2.2.7 ELISA检测小鼠血清中IgG1和IgG2a抗体亚型含量 | 第58页 |
| 2.2.8 免疫保护效果评价实验 | 第58-59页 |
| 2.2.9 统计学分析 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-72页 |
| 3.1 ELISA检测小鼠血清抗BvrR-IgG抗体水平 | 第60-61页 |
| 3.2 重组核酸疫苗pcDNA-BvrR对小鼠T细胞亚类的影响 | 第61页 |
| 3.3 重组核酸疫苗pcDNA-BvrR对小鼠淋巴细胞转化实验的影响 | 第61-62页 |
| 3.4 重组核酸疫苗pcDNA-BvrR对小鼠血清中IFN-γ分泌水平的影响 | 第62-63页 |
| 3.5 重组核酸疫苗pcDNA-BvrR对小鼠血清中IL-4分泌水平的影响 | 第63-64页 |
| 3.6 重组核酸疫苗pcDNA-BvrR对小鼠血清中IgG1和IgG2a亚类的影响. | 第64-65页 |
| 3.7 重组核酸疫苗pcDNA-BvrR免疫保护效果评价实验 | 第65-72页 |
| 3.7.1 攻毒保护试验 | 第65-66页 |
| 3.7.2 脾脏病理组织切片评价免疫保护效果 | 第66-72页 |
| 4 讨论 | 第72-76页 |
| 5 结论 | 第76-77页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 文献综述 | 第88-103页 |
| 参考文献 | 第96-103页 |
| 攻读学位期间取得的成果 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 个人简历 | 第105页 |
