致谢 | 第5-8页 |
摘要 | 第8-9页 |
文献综述 | 第9-19页 |
1 马立克病病毒的研究进展 | 第9-18页 |
1.1 MDV分类 | 第9-10页 |
1.2 MDV的流行病学 | 第10-11页 |
1.3 MDV基因组学及主要编码蛋白 | 第11-12页 |
1.4 MDV病毒结构学 | 第12-13页 |
1.5 MDV编码蛋白 | 第13-15页 |
1.6 MDV疫苗的研究进展 | 第15-16页 |
1.7 MDV诊断 | 第16-17页 |
1.8 MDV单抗研究进展 | 第17-18页 |
2 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
引言1 | 第19-20页 |
试验一 马立克病病毒纯化及鉴定 | 第20-32页 |
1 材料与方法 | 第20-27页 |
1.1 材料 | 第20-22页 |
1.2 方法 | 第22-27页 |
2 结果与分析 | 第27-31页 |
2.1 MDV纯化结果 | 第27-28页 |
2.2 MDV纯化鉴定 | 第28-31页 |
3 讨论 | 第31-32页 |
引言2 | 第32-33页 |
试验二 MDV单克隆抗体的制备 | 第33-42页 |
1 材料与方法 | 第33-38页 |
1.1 材料 | 第33-34页 |
1.2 方法 | 第34-38页 |
2 结果与分析 | 第38-41页 |
2.1 效价检测 | 第38-39页 |
2.2 单克隆抗体的IPMA筛选 | 第39页 |
2.3 单克隆抗体的IFA筛选 | 第39-40页 |
2.4 单克隆抗体的Western blot鉴定 | 第40-41页 |
2.5 单克隆抗体效价检测及亚型鉴定结果 | 第41页 |
3 讨论 | 第41-42页 |
引言3 | 第42-43页 |
试验三 马立克病病毒主要蛋白的表达 | 第43-62页 |
1 材料与方法 | 第43-54页 |
1.1 材料 | 第43-44页 |
1.2 实验方法 | 第44-54页 |
1.2.1 模板的获取 | 第44-45页 |
1.2.1.1 RNA的提取 | 第44-45页 |
1.2.2 反转录 | 第45页 |
1.2.3 载体构建 | 第45-47页 |
1.2.4 加A尾 | 第47页 |
1.2.5 连接pMD-19T | 第47-48页 |
1.2.6 转化 | 第48页 |
1.2.7 菌液 PCR | 第48页 |
1.2.8 测序 | 第48页 |
1.2.9 保菌 | 第48页 |
1.2.10 质粒的提取 | 第48-49页 |
1.2.11 PCR 产物回收 | 第49-50页 |
1.2.12 双酶切 | 第50页 |
1.2.13 连接pET-30a | 第50-51页 |
1.2.14 蛋白表达 | 第51-52页 |
1.2.15 表达产物的初步鉴定及可溶性分析 | 第52-53页 |
1.2.16 蛋白纯化条件的摸索 | 第53-54页 |
2 结果与分析 | 第54-61页 |
2.1 PCR核酸电泳分析 | 第54-55页 |
2.2 琼脂糖凝胶回收DNA | 第55页 |
2.3 菌液PCR | 第55-56页 |
2.4 双酶切 | 第56-57页 |
2.5 SDS-聚丙烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定 | 第57-58页 |
2.6 Western blot鉴定 | 第58-59页 |
2.7 最适IPTG浓度的优化 | 第59-60页 |
2.8 Ni-NAT亲和层析 | 第60-61页 |
3 讨论 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-70页 |
英文摘要 | 第70页 |