| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第10-16页 |
| 1.1 基因编辑技术 | 第10-14页 |
| 1.1.1 锌指核酸内切酶 | 第10-11页 |
| 1.1.2 转录激活因子样效应物核酸酶 | 第11-12页 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas9系统概述 | 第12-13页 |
| 1.1.4 CRISPR/Cas9系统应用 | 第13-14页 |
| 1.2 Rosa26位点与肌肉特异性启动子 | 第14-15页 |
| 1.3 MCK启动子 | 第15页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 2 小鼠肌肉特异性表达CRISPR/Cas9载体的构建 | 第16-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 载体信息 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂和药品 | 第16页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第16-18页 |
| 2.1.4 实验仪器及设备 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-26页 |
| 2.2.1 小鼠Rosa26-sgRNA/cas9表达载体的构建 | 第18-23页 |
| 2.2.2 MCK启动子的活性验证 | 第23-26页 |
| 2.3 实验结果 | 第26-30页 |
| 2.3.1 Ros26-PX459载体的构建与活性检测 | 第26页 |
| 2.3.2 MCK启动子的扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.3 MCK启动子与克隆载体连接鉴定 | 第27页 |
| 2.3.4 MCK启动子与表达载体连接 | 第27-28页 |
| 2.3.5 MCK启动子表达活性检验 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30页 |
| 2.5 本章小结 | 第30-31页 |
| 3 CRISPR/Cas9介导的C2C12细胞在Rosa26位点同源打靶 | 第31-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 实验载体信息 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂及药品 | 第31页 |
| 3.1.3 主要设备及仪器 | 第31页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第31-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 小鼠Rosa26位点同源打靶载体的构建 | 第32-35页 |
| 3.2.2 C2C12细胞的转染 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-42页 |
| 3.3.1 小鼠Rosa26位点同源重组载体的构建 | 第36-39页 |
| 3.3.2 同源打靶载体表达活性检测 | 第39-40页 |
| 3.3.3 同源打靶载体整合到C2C 12Rosa26位点 | 第40-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
