| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 核糖体失活蛋白 | 第10-13页 |
| 1.1.1 核糖体失活蛋白简介 | 第10页 |
| 1.1.2 核糖体失活蛋白的结构与分类 | 第10-11页 |
| 1.1.3 核糖体失活蛋白的酶活性 | 第11-12页 |
| 1.1.4 核糖体失活蛋白的生物应用 | 第12-13页 |
| 1.2 Ⅰ型核糖体失活蛋白MAP30 | 第13-17页 |
| 1.2.1 MAP30蛋白简介 | 第13页 |
| 1.2.2 MAP30结构 | 第13-14页 |
| 1.2.3 MAP30蛋白的功能与作用机制 | 第14-16页 |
| 1.2.4 MAP30药理作用 | 第16-17页 |
| 1.3 细胞凋亡 | 第17-19页 |
| 1.3.1 细胞凋亡的定义及特征 | 第17-18页 |
| 1.3.2 细胞凋亡与肿瘤发生 | 第18页 |
| 1.3.3 细胞凋亡的信号传导通路和分子机制 | 第18-19页 |
| 1.4 细胞穿膜肽 | 第19-23页 |
| 1.4.1 细胞穿膜肽的发现 | 第19-20页 |
| 1.4.2 人源性穿膜肽 | 第20页 |
| 1.4.3 新型人源性穿膜肽(HBD)的发现 | 第20-21页 |
| 1.4.4 细胞穿膜肽的穿膜机理研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4.5 细胞穿膜肽在抗肿瘤治疗中的应用 | 第22-23页 |
| 1.5 本课题研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 第2章 实验流程和方案依据及原理说明 | 第24-27页 |
| 2.1 实验流程 | 第24页 |
| 2.2 实验设计 | 第24-25页 |
| 2.3 实验原理 | 第25-27页 |
| 2.3.1 核糖体失活蛋白活性检测 | 第25页 |
| 2.3.2 FITC蛋白标记 | 第25-26页 |
| 2.3.3 细胞凋亡检测 | 第26-27页 |
| 第3章 材料与方法 | 第27-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 3.1.1 常用试剂 | 第27页 |
| 3.1.2 一般试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.3 常用缓冲液配制 | 第28-29页 |
| 3.1.4 肿瘤细胞品种 | 第29页 |
| 3.1.5 动物实验耗材 | 第29-30页 |
| 3.2 实验仪器 | 第30页 |
| 3.3 实验方法 | 第30-39页 |
| 3.3.1 DNA抽提 | 第30-31页 |
| 3.3.2 质粒构建 | 第31-35页 |
| 3.3.3 融合蛋白表达 | 第35页 |
| 3.3.4 融合蛋白纯化 | 第35页 |
| 3.3.5 DNA拓扑失活活性检测 | 第35-36页 |
| 3.3.6 N-糖苷酶活性检测 | 第36页 |
| 3.3.7 细胞培养 | 第36页 |
| 3.3.8 融合蛋白穿膜活性检测 | 第36-37页 |
| 3.3.9 MTT实验 | 第37页 |
| 3.3.10 流式凋亡检测 | 第37页 |
| 3.3.11 融合蛋白凋亡途径检测 | 第37-38页 |
| 3.3.12 小鼠体内肿瘤模型实验 | 第38-39页 |
| 第4章 实验结果与分析 | 第39-58页 |
| 4.1 苦瓜基因组DNA抽提 | 第39-40页 |
| 4.2 MAP30信号肽对融合蛋白可溶性表达的影响 | 第40-44页 |
| 4.2.1 相关表达载体构建 | 第41-42页 |
| 4.2.2 融合蛋白(His标签位于N端)表达与纯化 | 第42-44页 |
| 4.3 MAP30融合蛋白(His标签位于C端)载体构建、蛋白表达与纯化 | 第44-46页 |
| 4.3.1 MAP30-pET28b/MAP30-HBD-pET28b表达载体构建 | 第44页 |
| 4.3.2 MAP30融合蛋白(His位于C端)表达与纯化 | 第44-46页 |
| 4.4 HBD-MAP30-pET28b表达载体构建、蛋白表达与纯化 | 第46-48页 |
| 4.4.1 穿膜肽HBD位于MAP30蛋白N端表达载体构建 | 第46-47页 |
| 4.4.2 穿膜肽HBD位于MAP30蛋白N端融合蛋白表达与纯化 | 第47-48页 |
| 4.5 MAP30融合蛋白生物学活性检测 | 第48-49页 |
| 4.5.1 拓扑失活性活性检测 | 第48页 |
| 4.5.2 N-糖苷酶活性检测 | 第48-49页 |
| 4.6 MAP30融合蛋白穿膜能力的评估 | 第49-50页 |
| 4.7 MAP30融合蛋白细胞毒性研究-MTT实验 | 第50-52页 |
| 4.7.1 rMAP30和rMAP30-HBD蛋白对不同肿瘤细胞的毒性作用差异性研究 | 第50-52页 |
| 4.7.2 rMAP30-HBD和rHBD-MAP30对肿瘤细胞的毒性作用差异性研究 | 第52页 |
| 4.8 MAP30融合蛋白流式凋亡实验研究 | 第52-54页 |
| 4.8.1 流式凋亡检测rMAP30-HBD和rMAP30对HeLa细胞的凋亡 | 第52-53页 |
| 4.8.2 流式凋亡检测rMAP30-HBD和rMAP30对Bcap细胞的凋亡 | 第53-54页 |
| 4.9 MAP30融合蛋白凋亡途径研究 | 第54-56页 |
| 4.10 动物成瘤模型检测MAP30融合蛋白的体内抑瘤效果 | 第56-58页 |
| 第5章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
