| 摘要 | 第3-4页 |
| Summary | 第4页 |
| 缩略词英汉对照表 | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1 朊蛋白及朊样蛋白在癌症发生中的作用 | 第10-19页 |
| 1.1 细胞型朊蛋白（PrPC） | 第10-12页 |
| 1.1.1 PrPC的结构、细胞定位和功能 | 第11-12页 |
| 1.1.2 PrPC在正常人体组织中的表达水平 | 第12页 |
| 1.2 PrP在癌组织中高水平表达 | 第12-16页 |
| 1.2.1 胃癌组织中的PrPC | 第12-13页 |
| 1.2.2 PrP在胃癌多药耐性中的作用 | 第13-14页 |
| 1.2.3 胰腺癌中PrP的高表达 | 第14页 |
| 1.2.4 PrP在乳腺癌中过表达 | 第14-15页 |
| 1.2.5 结肠癌中PrP的过表达 | 第15页 |
| 1.2.6 前列腺癌中PrP的过表达 | 第15页 |
| 1.2.7 PrP在肝细胞癌、.腔鳞状细胞癌中过表达 | 第15-16页 |
| 1.3 Doppel蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4 Doppel蛋白在癌症中的作用 | 第17-18页 |
| 1.4.1 星形细胞瘤、胃腺癌和间变性脑膜瘤 | 第17页 |
| 1.4.2 急性髓细胞性白血病和骨髓增生异常综合征 | 第17-18页 |
| 1.5 Shadoo蛋白 | 第18页 |
| 1.6 p53——潜在的朊样蛋白 | 第18页 |
| 1.7 小结 | 第18-19页 |
| 2 研究目的与意义 | 第19页 |
| 3 研究内容与方法 | 第19-20页 |
| 3.1 鸡朊样蛋白Shadoo的基因序列与结构特征分析 | 第19页 |
| 3.2 鸡朊样蛋白Doppel基因的克隆及与PrPC的相互关系分析 | 第19页 |
| 3.3 鸡PrP基因真核表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达 | 第19-20页 |
| 第二章 鸡朊样蛋白Shadoo的基因序列与结构特征分析 | 第20-25页 |
| 1 材料与方法 | 第20-21页 |
| 1.1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1.1 组织、载体、菌株、细胞 | 第20页 |
| 1.1.2 酶类、试剂 | 第20页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 1.2 方法 | 第21页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第21页 |
| 1.2.2 ChSPRN基因的PCR扩增与回收 | 第21页 |
| 1.2.3 ChSPRN基因的克隆与测序 | 第21页 |
| 1.2.4 ChSPRN基因序列与结构分析 | 第21页 |
| 2 结果与分析 | 第21-24页 |
| 2.1 目的基因的PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2 目的基因的测序结果分析 | 第22页 |
| 2.3 ChSho与ChPrP的mRNA结构分析 | 第22页 |
| 2.4 ChSho蛋白的结构预测 | 第22-24页 |
| 2.4.1 氨基酸序列与一级结构分析 | 第22页 |
| 2.4.2 ChSho二级结构、跨膜区及三级结构特征预测与分析 | 第22-24页 |
| 3 讨论 | 第24-25页 |
| 3.1 SPRN与PRNP相似的进化关系 | 第24页 |
| 3.2 Sho与PrP的相互作用 | 第24-25页 |
| 第三章 鸡朊样蛋白Doppel基因的克隆及其与PrPC相互关系分析 | 第25-31页 |
| 1 材料与方法 | 第25-27页 |
| 1.1 材料 | 第25页 |
| 1.1.1 血样 | 第25页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第25页 |
| 1.2 方法 | 第25-27页 |
| 1.2.1 鸡全血基因组总DNA的提取 | 第26页 |
| 1.2.2 多种生物Dpl氨基酸保守序列分析 | 第26页 |
| 1.2.3 以鸡密码子偏好性反向推导保守区氨基酸的DNA序列 | 第26页 |
| 1.2.4 引物的设计与合成 | 第26-27页 |
| 1.2.5 目的基因的PCR扩增 | 第27页 |
| 1.2.6 克隆与重组质粒的测序 | 第27页 |
| 1.2.7 测序结果与GenBank数据库序列比对 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-29页 |
| 2.1 最佳退火温度的摸索与引物优化 | 第27-28页 |
| 2.2 目的基因的PCR扩增 | 第28页 |
| 2.3 菌液PCR鉴定及序列测定 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 鸡PrP基因真核表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达 | 第31-37页 |
| 1 材料与方法 | 第31-33页 |
| 1.1 材料 | 第31页 |
| 1.1.1 菌种、细胞及载体 | 第31页 |
| 1.1.2 酶类、试剂和培养基 | 第31页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 1.2 方法 | 第31-33页 |
| 1.2.1 基因合成与密码子优化 | 第32页 |
| 1.2.2 引物设计与合成 | 第32页 |
| 1.2.3 目的片段的PCR扩增 | 第32页 |
| 1.2.4 重组表达载体的构建与鉴定 | 第32页 |
| 1.2.5 酵母菌株的纯化 | 第32页 |
| 1.2.6 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 1.2.7 重组表达载体的线性化与电转化 | 第33页 |
| 1.2.8 阳性毕赤酵母菌株的筛选 | 第33页 |
| 1.2.9 重组酵母的诱导表达、纯化与SDS-PAGE鉴定 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-36页 |
| 2.1 鸡PrP（25～248）的密码子优化结果 | 第33页 |
| 2.2 未优化目的片段的PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| 2.3 重组表达载体双酶切与菌液PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4 重组菌株表型的PCR鉴定与选择培养基鉴定 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-37页 |
| 全文结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 作者简介 | 第47-48页 |
| 导师简介 | 第48-49页 |
