| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩写词中英文对照表 | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| 1 受体酪氨酸激酶(RTK)家族 | 第11-12页 |
| 2 表皮生长因子受体(EGFR)家族信号介绍 | 第12-15页 |
| 3 成纤维细胞生长因子受体(FGFR)信号介绍 | 第15-19页 |
| 4 在肿瘤中FGFR2与EGFR的相关性 | 第19-20页 |
| 5 研究思路 | 第20-21页 |
| 5.1 制备重组EGFR胞外段蛋白 | 第20页 |
| 5.2 msFGFR2c与EGFR相互作用研究 | 第20-21页 |
| 6 研究意义和创新点 | 第21-22页 |
| 7 研究路线 | 第22-23页 |
| 第二章 实验仪器及材料 | 第23-34页 |
| 1 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2 主要实验材料 | 第24-34页 |
| 2.1 细胞株 | 第24页 |
| 2.2 试剂 | 第24-25页 |
| 2.3 常用试剂配方 | 第25-34页 |
| 第三章 实验方法 | 第34-45页 |
| 1 细胞培养 | 第34-35页 |
| 1.1 细胞复苏 | 第34页 |
| 1.2 细胞换液 | 第34页 |
| 1.3 细胞传代 | 第34页 |
| 1.4 细胞冻存 | 第34-35页 |
| 2 EGFR胞外段表达纯化及鉴定 | 第35-39页 |
| 2.1 EGFR胞外段基因表达载体的构建 | 第35页 |
| 2.2 将正确连接的质粒载体转染感受态细胞 | 第35-36页 |
| 2.3 表达鉴定、优化及可溶性分析 | 第36页 |
| 2.4 WesternBlot检测 | 第36页 |
| 2.5 放大表达与亲和纯化 | 第36-37页 |
| 2.6 WesternBlot检测 | 第37页 |
| 2.7 蛋白透析 | 第37页 |
| 2.8 琼脂糖核酸电泳 | 第37页 |
| 2.9 SDS-PAGE电泳以及考马斯亮蓝染色检测 | 第37-38页 |
| 2.10 质粒小提试剂盒抽提质粒(按照质粒抽提试剂盒说明书进行操作) | 第38-39页 |
| 3 生物素标记msFGFR2c | 第39页 |
| 3.1 根据生物素标记试剂盒标记msFGFR2c | 第39页 |
| 4 CCK-8法检测bFGF,EGF,msFGFR2c,EGFR胞外段的生物活性 | 第39-40页 |
| 5 免疫共沉淀(Co-IP)检测msFGFR2c与外源EGFR结合 | 第40-41页 |
| 5.1 转染 | 第40页 |
| 5.2 诱导 | 第40-41页 |
| 5.3 Co-IP制样 | 第41页 |
| 6 293T细胞中共聚焦显微镜检测msFGFR2c与EGFR的共定位现象 | 第41-42页 |
| 6.1 293 T细胞的培养 | 第41页 |
| 6.2 将pCDNA3.1(-)-EGFR-HA质粒瞬时转染293T细胞 | 第41-42页 |
| 6.3 激光扫描共聚焦显微镜检测 | 第42页 |
| 7 WesternBlot | 第42-44页 |
| 7.1 细胞总蛋白的抽提(膜蛋白) | 第42-43页 |
| 7.2 BCA法测定总蛋白含量 | 第43页 |
| 7.3 SDS-PAGE胶分离蛋白 | 第43-44页 |
| 8 等温滴定量热法(ITC)研究EGFR胞外段与msFGFR2c的结合力 | 第44页 |
| 9 统计学方法 | 第44-45页 |
| 第四章 实验结果 | 第45-56页 |
| 1 重组EGFR胞外段蛋白的表达构建及鉴定 | 第45-48页 |
| 1.1 EGFR胞外段表达载体的构建 | 第45页 |
| 1.2 目的蛋白的表达鉴定 | 第45-46页 |
| 1.3 目的蛋白诱导表达条件优化 | 第46-47页 |
| 1.4 蛋白可溶性表达分析 | 第47页 |
| 1.5 蛋白WB检测结果 | 第47-48页 |
| 2 重组EGFR胞外段蛋白的纯化及鉴定 | 第48-50页 |
| 2.1 镍柱亲和层析纯化及鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2 SDS-PAGE电泳鉴定纯化结果 | 第49-50页 |
| 2.3 Westernblot鉴定纯化情况 | 第50页 |
| 3 CCK-8法检测bFGF,EGF,msFGFR2c,EGFR胞外段蛋白的生物活性 | 第50-51页 |
| 4 生物素的标记率检测 | 第51-52页 |
| 5 msFGFR2c抑制DU145细胞中EGFR的磷酸化 | 第52页 |
| 6 免疫共沉淀(Co-IP)检测msFGFR2c能与EGFR结合 | 第52-54页 |
| 7 激光共聚焦检测msFGFR2c能与外源EGFR发生共定位 | 第54-55页 |
| 8 等温滴定量热法(ITC)研究msFGFR2c与EGFR胞外段的结合力 | 第55-56页 |
| 第五章 讨论 | 第56-57页 |
| 第六章 结论及展望 | 第57-58页 |
| 1 结论 | 第57页 |
| 2 展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 在校期间发表论文清单 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
