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基于转录组分析的中华绒螯蟹细胞黏附蛋白与整合素和CuZn-SOD互作及Cd2+胁迫对其免疫系统的影响

摘要第3-5页
ABSTRACT第5-6页
第一章 引言第10-22页
    1.1 甲壳动物先天免疫系统研究进展第10-17页
        1.1.1 免疫相关基因研究进展第10-17页
    1.2 细胞黏附蛋白(Peroxinectin)、整合素、CuZn-SOD互作关系研究进展第17-18页
    1.3 重金属对甲壳动物免疫系统的影响第18-20页
        1.3.1 重金属的危害第18-19页
        1.3.2 重金属对甲壳动物非特异性免疫系统的影响第19-20页
    1.4 本论文的研究目的和意义第20-22页
第二章 中华绒螯蟹血细胞转录组分析第22-37页
    2.1 材料与方法第22-25页
        2.1.1 实验材料第22页
        2.1.2 试剂仪器第22-23页
        2.1.3 实验方法第23-25页
    2.2 实验结果与分析第25-35页
        2.2.1 RNA样品质量检测第25页
        2.2.2 测序数据产出和质量评估第25-26页
        2.2.3 序列拼接组装第26页
        2.2.4 比对注释第26页
        2.2.5 GO、COG功能分类第26-27页
        2.2.6 KEGG代谢通路分析第27页
        2.2.7 表达差异分析第27-28页
        2.2.8 差异基因GO分类统计第28页
        2.2.9 差异基因KEGG分析第28页
        2.2.10 SNP分析第28-29页
        2.2.11 SSR分析第29页
        2.2.12 中华绒螯蟹免疫相关基因分析第29-35页
    2.3 讨论第35-37页
第三章 中华绒螯蟹细胞黏附蛋白(Peroxinectin)与Integrin及CuZn-SOD蛋白互作关系探究第37-53页
    3.1 实验材料第37页
    3.2 实验方法第37-44页
        3.2.1 引物的设计第37-38页
        3.2.2 中华绒螯蟹血细胞总RNA的提取第38页
        3.2.3 RNA质量的检测第38页
        3.2.4 总RNA的DNase处理第38-39页
        3.2.5 荧光定量cDNA模板的合成第39页
        3.2.6 qRT-PCR检测第39-40页
        3.2.7 SMART cDNA的合成第40-41页
        3.2.8 Peroxinectin,Integrin,CuZn-SOD基因ORF框的获得第41页
        3.2.9 PCR产物检测与目的片段的回收第41页
        3.2.10 PXN-pBiFC-vc155,Integrin-pBiFC-vn155,CuZn-SOD-pBiFC-vn155重组载体的构建第41-42页
        3.2.11 重组质粒的检测第42-43页
        3.2.12 细胞共转染第43-44页
    3.3 结果第44-50页
        3.3.1 嗜水气单胞杆菌刺激后PXN、Integrin、SOD的表达变化第44-47页
        3.3.2 ORF框的获得第47-48页
        3.3.3 双分子荧光互补重组质粒的构建第48页
        3.3.4 BIFC分析第48-50页
    3.4 讨论第50-53页
第四章 Cd~(2+)胁迫对中华绒螯蟹免疫相关基因的影响第53-66页
    4.1 实验材料和方法第53-56页
        4.1.1 实验材料第53页
        4.1.2 Cd~(2+)胁迫实验设计第53-54页
        4.1.3 总RNA的提取第54页
        4.1.4 RNA质量的检测第54页
        4.1.5 荧光定量cDNA模板的合成第54页
        4.1.6 荧光定量PCR引物设计第54-55页
        4.1.7 荧光定量检测第55页
        4.1.8 数据处理和分析第55-56页
    4.2 结果第56-63页
        4.2.0 实时荧光定量PCR可行性分析第56页
        4.2.1 Cd~(2+)胁迫对免疫模式识别蛋白相关基因LGBP表达的影响第56-57页
        4.2.2 Cd~(2+)胁迫对免疫信号传导基因Dorsal表达的影响第57-58页
        4.2.3 Cd~(2+)胁迫对免疫效应相关基因PPAF表达的影响第58-59页
        4.2.4 Cd~(2+)胁迫对免疫效应相关基因GPx表达的影响第59-60页
        4.2.5 Cd~(2+)胁迫对免疫效应相关基因GST表达的影响第60-61页
        4.2.6 Cd~(2+)胁迫对免疫效应相关基因Integrin表达的影响第61-62页
        4.2.7 Cd~(2+)胁迫对免疫效应相关基因PXN表达的影响第62-63页
    4.3 讨论第63-66页
第五章 Cd~(2+)胁迫对中华绒螯蟹鳃的影响第66-70页
    5.1 材料与方法第66-67页
        5.1.1 组织样品的采集第66页
        5.1.2 实验方法第66-67页
        5.1.3 数据测量和分析第67页
    5.2 结果第67-69页
    5.3 讨论第69-70页
第六章 结论与展望第70-72页
    6.1 结论第70-71页
    6.2 进一步工作的方向第71-72页
致谢第72-73页
参考文献第73-83页
附录A第83-91页

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