| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第10-22页 |
| 1.1 甲壳动物先天免疫系统研究进展 | 第10-17页 |
| 1.1.1 免疫相关基因研究进展 | 第10-17页 |
| 1.2 细胞黏附蛋白(Peroxinectin)、整合素、CuZn-SOD互作关系研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 重金属对甲壳动物免疫系统的影响 | 第18-20页 |
| 1.3.1 重金属的危害 | 第18-19页 |
| 1.3.2 重金属对甲壳动物非特异性免疫系统的影响 | 第19-20页 |
| 1.4 本论文的研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 中华绒螯蟹血细胞转录组分析 | 第22-37页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验方法 | 第23-25页 |
| 2.2 实验结果与分析 | 第25-35页 |
| 2.2.1 RNA样品质量检测 | 第25页 |
| 2.2.2 测序数据产出和质量评估 | 第25-26页 |
| 2.2.3 序列拼接组装 | 第26页 |
| 2.2.4 比对注释 | 第26页 |
| 2.2.5 GO、COG功能分类 | 第26-27页 |
| 2.2.6 KEGG代谢通路分析 | 第27页 |
| 2.2.7 表达差异分析 | 第27-28页 |
| 2.2.8 差异基因GO分类统计 | 第28页 |
| 2.2.9 差异基因KEGG分析 | 第28页 |
| 2.2.10 SNP分析 | 第28-29页 |
| 2.2.11 SSR分析 | 第29页 |
| 2.2.12 中华绒螯蟹免疫相关基因分析 | 第29-35页 |
| 2.3 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 中华绒螯蟹细胞黏附蛋白(Peroxinectin)与Integrin及CuZn-SOD蛋白互作关系探究 | 第37-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-44页 |
| 3.2.1 引物的设计 | 第37-38页 |
| 3.2.2 中华绒螯蟹血细胞总RNA的提取 | 第38页 |
| 3.2.3 RNA质量的检测 | 第38页 |
| 3.2.4 总RNA的DNase处理 | 第38-39页 |
| 3.2.5 荧光定量cDNA模板的合成 | 第39页 |
| 3.2.6 qRT-PCR检测 | 第39-40页 |
| 3.2.7 SMART cDNA的合成 | 第40-41页 |
| 3.2.8 Peroxinectin,Integrin,CuZn-SOD基因ORF框的获得 | 第41页 |
| 3.2.9 PCR产物检测与目的片段的回收 | 第41页 |
| 3.2.10 PXN-pBiFC-vc155,Integrin-pBiFC-vn155,CuZn-SOD-pBiFC-vn155重组载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.11 重组质粒的检测 | 第42-43页 |
| 3.2.12 细胞共转染 | 第43-44页 |
| 3.3 结果 | 第44-50页 |
| 3.3.1 嗜水气单胞杆菌刺激后PXN、Integrin、SOD的表达变化 | 第44-47页 |
| 3.3.2 ORF框的获得 | 第47-48页 |
| 3.3.3 双分子荧光互补重组质粒的构建 | 第48页 |
| 3.3.4 BIFC分析 | 第48-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 Cd~(2+)胁迫对中华绒螯蟹免疫相关基因的影响 | 第53-66页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第53-56页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第53页 |
| 4.1.2 Cd~(2+)胁迫实验设计 | 第53-54页 |
| 4.1.3 总RNA的提取 | 第54页 |
| 4.1.4 RNA质量的检测 | 第54页 |
| 4.1.5 荧光定量cDNA模板的合成 | 第54页 |
| 4.1.6 荧光定量PCR引物设计 | 第54-55页 |
| 4.1.7 荧光定量检测 | 第55页 |
| 4.1.8 数据处理和分析 | 第55-56页 |
| 4.2 结果 | 第56-63页 |
| 4.2.0 实时荧光定量PCR可行性分析 | 第56页 |
| 4.2.1 Cd~(2+)胁迫对免疫模式识别蛋白相关基因LGBP表达的影响 | 第56-57页 |
| 4.2.2 Cd~(2+)胁迫对免疫信号传导基因Dorsal表达的影响 | 第57-58页 |
| 4.2.3 Cd~(2+)胁迫对免疫效应相关基因PPAF表达的影响 | 第58-59页 |
| 4.2.4 Cd~(2+)胁迫对免疫效应相关基因GPx表达的影响 | 第59-60页 |
| 4.2.5 Cd~(2+)胁迫对免疫效应相关基因GST表达的影响 | 第60-61页 |
| 4.2.6 Cd~(2+)胁迫对免疫效应相关基因Integrin表达的影响 | 第61-62页 |
| 4.2.7 Cd~(2+)胁迫对免疫效应相关基因PXN表达的影响 | 第62-63页 |
| 4.3 讨论 | 第63-66页 |
| 第五章 Cd~(2+)胁迫对中华绒螯蟹鳃的影响 | 第66-70页 |
| 5.1 材料与方法 | 第66-67页 |
| 5.1.1 组织样品的采集 | 第66页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第66-67页 |
| 5.1.3 数据测量和分析 | 第67页 |
| 5.2 结果 | 第67-69页 |
| 5.3 讨论 | 第69-70页 |
| 第六章 结论与展望 | 第70-72页 |
| 6.1 结论 | 第70-71页 |
| 6.2 进一步工作的方向 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 附录A | 第83-91页 |
