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小麦雄性不育蛋白组学与泛素化修饰蛋白组学的研究

摘要第5-8页
ABSTRACT第8-11页
第一章 文献综述第16-32页
    1.1 小麦杂种优势利用概况第16页
    1.2 小麦杂种优势利用途径以及存在的问题第16-18页
        1.2.1 小麦核质互作型雄性不育(CMS)及杂种优势的利用第16-17页
        1.2.2 小麦核型雄性不育的研究及杂种优势的利用第17页
        1.2.3 小麦光温敏雄性不育及两系杂交体系第17-18页
        1.2.4 化学杂交剂诱导小麦雄性不育及杂种优势利用第18页
    1.3 植物雄性不育机理研究第18-24页
        1.3.1 细胞学水平研究植物雄性不育第18-21页
        1.3.2 生理生化水平研究植物雄性不育第21-24页
    1.4 线粒体与雄性不育第24页
    1.5 雄性不育分子机理研究第24-29页
        1.5.1 蛋白质组学研究植物雄性不育第25-26页
        1.5.2 泛素蛋白与植物雄性不育第26-28页
        1.5.3 泛素\蛋白酶体降解途径与植物雄性不育第28-29页
        1.5.4 组蛋白的泛素化与雄性不育第29页
    1.6 免疫印记(Western Blot)技术第29-30页
        1.6.1 免疫印记研究进展第29-30页
        1.6.2 免疫印记原理第30页
    1.7 本研究的目的意义第30-32页
        1.7.1 花药蛋白质组学分析第30页
        1.7.2 泛素化修饰蛋白质组学和线粒体蛋白以及组蛋白的泛素化分析第30-32页
第二章 小麦生理型雄性不育花药及其对应可育小麦花药的差异蛋白质组学分析第32-69页
    2.1 材料和方法第32-38页
        2.1.1 实验材料 – 小麦花药收集第32-33页
        2.1.2 组织学分析和表型特征第33页
        2.1.3 仪器和试剂第33页
        2.1.4 花药总蛋白的提取第33-34页
        2.1.5 蛋白质浓度测定第34页
        2.1.6 双向电泳第34-36页
        2.1.7 PDQuest 软件分析第36页
        2.1.8 挖取蛋白点的质谱鉴定分析第36-37页
        2.1.9 引物合成与荧光定量步骤第37-38页
        2.1.10 活性氧以及抗氧化酶的活性测定第38页
    2.2 结果与分析第38-60页
        2.2.1 不同发育时期的细胞学观察和比较第38-40页
        2.2.2 正常可育和化杀诱导不育花药组织切片分析第40-41页
        2.2.3 双向电泳和蛋白鉴定结果分析第41-60页
    2.3 讨论第60-68页
        2.3.1 碳代谢和细胞壁相关蛋白第61-64页
        2.3.2 活性氧代谢以及刺激应答相关蛋白第64-66页
        2.3.3 光合作用相关蛋白第66-67页
        2.3.4 ABC 转运蛋白第67-68页
        2.3.5 泛素-26S 蛋白酶体蛋白第68页
    2.4 结论第68-69页
第三章 化学杂交剂诱导小麦雄性不育中多聚泛素修饰蛋白质组学的研究第69-94页
    3.1 材料和方法第69-73页
        3.1.1 实验材料 – 小麦的生长和花药收集同 2.1.1第69页
        3.1.2 试剂和仪器第69-70页
        3.1.3 花药总蛋白提取和多聚化泛素蛋白的富集第70-71页
        3.1.4 SDS-PAGE 电泳染色和 LC-MS/MS 鉴定方法第71-72页
        3.1.5 数据库检索分析第72-73页
    3.2 结果与分析第73-87页
        3.2.1 育性调查和细胞学观察第73-75页
        3.2.2 花药总蛋白的蛋白质浓度测定和 MINI 胶上样量的确定第75-76页
        3.2.3 SDS-PAGE 凝胶电泳的差异表达条带分析第76-78页
        3.2.4 差异条带质谱测序结果分析第78-87页
    3.3 讨论第87-93页
        3.3.1 碳水化合物和能量代谢过程的几个相关蛋白第87-90页
        3.3.2 蛋白质代谢过程的几个相关蛋白第90-91页
        3.3.3 光合作用相关蛋白第91页
        3.3.4 植物次生代谢相关蛋白第91页
        3.3.5 胁迫相关蛋白第91-92页
        3.3.6 转录因子相关蛋白第92-93页
        3.3.7 细胞色素 P450第93页
    3.4 结论第93-94页
第四章 小麦雄性不育中β-1, 3 -葡聚糖酶活性和胼胝质沉积相关基因的研究第94-106页
    4.1 材料和方法第94-97页
        4.1.1 实验材料第94页
        4.1.2 仪器以及试剂第94-95页
        4.1.3 品红染色和苯胺蓝复染步骤第95页
        4.1.4 β-1, 3 -葡聚糖酶的提取和标准曲线制做以及活性的测定第95-96页
        4.1.5 总 RNA 的提取和 cDNA 的合成第96-97页
        4.1.6 引物合成与荧光定量步骤第97页
    4.2 结果与分析第97-103页
        4.2.1 β-1, 3 -葡聚糖酶蛋白 2-D 结果第97-98页
        4.2.2 小孢子发育时期和胼胝质形态分析第98-99页
        4.2.3 葡萄糖标准曲线第99页
        4.2.4 β-1, 3 -葡聚糖酶活性的测定第99-100页
        4.2.5 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphorylase)的荧光定量分析第100-102页
        4.2.6 标准曲线的建立第102-103页
    4.3 讨论第103-106页
第五章 化学杀雄剂诱导小麦雄性不育过程线粒体蛋白泛素化水平的差异性研究第106-111页
    5.1 线粒体蛋白提取材料和方法第107-108页
        5.1.1 实验材料第107页
        5.1.2 线粒体蛋白提取仪器以及试剂第107页
        5.1.3 小麦小花线粒体蛋白的制备第107-108页
        5.1.4 western blot 操作步骤第108页
    5.2 结果与分析第108-110页
        5.2.1 线粒体蛋白的 SDS-PAGE 和 western blot第108-110页
    5.3 讨论第110-111页
第六章 化学杂交剂诱导小麦雄性不育组蛋白泛素化水平的差异性研究第111-118页
    6.1 组蛋白蛋白提取材料和方法第112-113页
        6.1.1 实验材料的收集同 5.1.1 章第112页
        6.1.2 试剂及其配制第112页
        6.1.3 组蛋白的提取第112页
        6.1.4 组蛋白的 western blot 验证第112页
        6.1.5 组蛋白泛素化 western blot 验证第112-113页
        6.1.6 小麦 RAD-6 的克隆测序以及荧光定量分析第113页
    6.2 组蛋白的验证结果和泛素化结果分析第113-115页
        6.2.1 组蛋白的验证结果第113-114页
        6.2.2 组蛋白的泛素化结果分析第114-115页
    6.3 组蛋白 H2B 的 E2 泛素化连接酶 RAD6 的实时荧光定量表达分析第115-116页
    6.4 讨论第116-118页
第七章 总结第118-121页
    7.1 结论第118-119页
        7.1.1 花药全蛋白蛋白质组学结论第118页
        7.1.2 泛素化修饰蛋白质组学结论第118页
        7.1.3 胼胝质与雄性不育结论第118-119页
        7.1.4 线粒体蛋白与组蛋白的泛素化结论第119页
    7.2 本研究的创新点第119-121页
参考文献第121-133页
缩略词第133-135页
致谢第135-136页
作者简介第136-137页

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