| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| ·简介 | 第13-14页 |
| ·糖基化 | 第13页 |
| ·皂苷类化合物 | 第13-14页 |
| ·化学法催化合成的糖基化反应 | 第14-16页 |
| ·化学法催化形成碳糖苷的策略 | 第14-15页 |
| ·化学法对糖基受体中糖基部分延伸的方法 | 第15-16页 |
| ·酶法催化合成的糖基化反应 | 第16-25页 |
| ·糖基转移酶催化的转糖基反应 | 第17-22页 |
| ·糖苷酶催化的转糖基反应 | 第22-25页 |
| ·甾醇化合物的体外糖基随机化 | 第25-30页 |
| ·组合化学法建立合成甾体皂甙库 | 第25-27页 |
| ·体外糖基随机化 | 第27-30页 |
| ·本论文的研究思路及主要内容提要 | 第30-31页 |
| 第二章 用于薯蓣皂素糖基化的生物催化剂的制备 | 第31-51页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·材料和方法 | 第31-43页 |
| ·试剂和仪器 | 第31-32页 |
| ·LB培养基 | 第32页 |
| ·大肠杆菌培养条件 | 第32页 |
| ·薯蓣皂素糖基转移酶的筛选 | 第32页 |
| ·PCR实验中引物的设计与合成 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·质粒抽提 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第34页 |
| ·基因的克隆 | 第34-38页 |
| ·基因的表达 | 第38页 |
| ·聚丙烯酰胺变性凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第38-39页 |
| ·重组酶活力的检测 | 第39-42页 |
| ·Bradford法测定蛋白含量 | 第42-43页 |
| ·生物催化剂的制备及保藏 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-50页 |
| ·薯蓣皂素糖基转移酶的筛选结果 | 第43页 |
| ·基因克隆结果 | 第43页 |
| ·基因的诱导表达 | 第43-48页 |
| ·延龄草苷液相色谱标准曲线 | 第48-49页 |
| ·尿苷二磷酸葡萄糖液相色谱标准曲线 | 第49页 |
| ·无机磷酸根浓度标准曲线 | 第49-50页 |
| ·蛋白浓度标准曲线 | 第50页 |
| ·冻干酶粉的比酶活力 | 第50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 多酶一锅催化合成薯蓣皂素糖苷 | 第51-60页 |
| ·引言 | 第51-52页 |
| ·材料与方法 | 第52-54页 |
| ·试剂和仪器 | 第52页 |
| ·延龄草苷标准品 | 第52页 |
| ·生物催化剂 | 第52页 |
| ·延龄草苷的HPLC分析方法 | 第52页 |
| ·助溶剂对延龄草苷产率的影响 | 第52页 |
| ·反应pH对延龄草苷产率的影响 | 第52-53页 |
| ·反应温度对延龄草苷产率的影响 | 第53页 |
| ·一锅合成延龄草苷的反应进程 | 第53页 |
| ·正交试验法优化底物浓度 | 第53页 |
| ·延龄草苷的酶法制备试验 | 第53-54页 |
| ·延龄草苷产品的鉴定表征 | 第54页 |
| ·结果和讨论 | 第54-58页 |
| ·助溶剂对延龄草苷产率的影响 | 第54-55页 |
| ·起始pH对延龄草苷产率的影响 | 第55页 |
| ·反应温度对延龄草苷产率的影响 | 第55-56页 |
| ·一锅法合成延龄草苷的反应进程 | 第56-57页 |
| ·正交试验法优化不同底物的配比 | 第57页 |
| ·龄草苷的酶法制备及结构表征 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-60页 |
| 第四章 三种固定化酶组合催化合成尿苷二磷酸葡萄糖 | 第60-79页 |
| ·引言 | 第60-61页 |
| ·材料和方法 | 第61-66页 |
| ·试剂和仪器 | 第61页 |
| ·生物催化剂 | 第61页 |
| ·UDP-Glc的HPLC分析方法 | 第61页 |
| ·氨基修饰磁性纳米颗粒的活化 | 第61-62页 |
| ·酶的固定化方法以及相关常数的测定 | 第62页 |
| ·酶活力的测定方法 | 第62页 |
| ·三种游离酶和固定化酶的最适反应pH值测定 | 第62页 |
| ·三种游离酶和固定化酶的热稳定性测定 | 第62页 |
| ·游离酶和固定化酶的动力学参数测定 | 第62-63页 |
| ·三种固定化酶组合催化合成尿苷二磷酸葡萄糖反应条件的优化 | 第63-64页 |
| ·三种固定化酶组合多批次催化合成尿苷二磷酸葡萄糖 | 第64页 |
| ·尿苷二磷酸葡萄糖的纯化及制备 | 第64-66页 |
| ·尿苷二磷酸葡萄糖的结构鉴定 | 第66页 |
| ·结果和讨论 | 第66-77页 |
| ·酶固定化相关常数的测定 | 第66-67页 |
| ·三种游离酶和固定化酶的最适反应pH值测定结果 | 第67-69页 |
| ·三种游离酶和固定化酶的热稳定性研究 | 第69-70页 |
| ·游离酶和固定化酶的反应动力学 | 第70页 |
| ·三种固定化酶组合催化合成尿苷二磷酸葡萄糖反应条件的优化结果 | 第70-75页 |
| ·三种固定化酶催化合成尿苷二磷酸葡萄糖 | 第75-76页 |
| ·尿苷二磷酸葡萄糖的纯化及其表征 | 第76-77页 |
| ·本章小结 | 第77-79页 |
| 第五章 用固定化麦芽糊精磷酸化酶催化合成α-D-葡萄糖-1-磷酸 | 第79-86页 |
| ·引言 | 第79-80页 |
| ·材料和方法 | 第80-81页 |
| ·试剂和仪器 | 第80页 |
| ·生物催化剂 | 第80页 |
| ·葡萄糖-1-磷酸的HPLC分析方法 | 第80页 |
| ·酶活力的测定方法 | 第80页 |
| ·固定化酶的制备方法 | 第80-81页 |
| ·固定化酶催化合成葡萄糖-1-磷酸的反应条件优化 | 第81页 |
| ·固定化酶多批次催化合成葡萄糖-1-磷酸 | 第81页 |
| ·葡萄糖-1-磷酸的纯化及制备 | 第81页 |
| ·葡萄糖-1-磷酸的鉴定表征 | 第81页 |
| ·结果和讨论 | 第81-85页 |
| ·葡萄糖-1-磷酸的液相色谱标准曲线 | 第81-82页 |
| ·固定化酶催化合成葡萄糖-1-磷酸的反应条件优化 | 第82-84页 |
| ·固定化麦芽糊精磷酸化酶催化合成葡萄糖-1-磷酸 | 第84页 |
| ·葡萄糖-1-磷酸的纯化及其表征 | 第84-85页 |
| ·本章小结 | 第85-86页 |
| 第六章 酶法合成α-D-半乳糖-1-磷酸 | 第86-97页 |
| ·引言 | 第86-87页 |
| ·材料和方法 | 第87-90页 |
| ·试剂和仪器 | 第87页 |
| ·PCR实验中引物的设计与合成 | 第87页 |
| ·基因的克隆 | 第87-88页 |
| ·重组GalK蛋白的表达及其制备 | 第88页 |
| ·DNS法检测半乳糖激酶的活力 | 第88-89页 |
| ·半乳糖激酶最适反应pH值的测定 | 第89页 |
| ·半乳糖激酶热稳定性的考察 | 第89页 |
| ·半乳糖激酶的动力学参数测定 | 第89页 |
| ·半乳糖激酶催化合成半乳糖-1-磷酸反应条件的优化 | 第89页 |
| ·半乳糖激酶催化合成半乳糖-1-磷酸及其制备 | 第89-90页 |
| ·结果和讨论 | 第90-96页 |
| ·galk基因的克隆表达结果 | 第90-91页 |
| ·半乳糖—DNS标准曲线的绘制 | 第91页 |
| ·半乳糖激酶的制备及活力的测定 | 第91页 |
| ·半乳糖激酶最适反应pH值的确定 | 第91-92页 |
| ·半乳糖激酶热稳定性的考察 | 第92-93页 |
| ·半乳糖激酶的动力学参数研究 | 第93页 |
| ·底物浓度对半乳糖激酶的影响 | 第93-94页 |
| ·半乳糖激酶合成半乳糖-1-磷酸的反应进程 | 第94-95页 |
| ·半乳糖激酶催化合成半乳糖-1-磷酸及其制备 | 第95-96页 |
| ·本章小结 | 第96-97页 |
| 结论和展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-110页 |
| 附录 | 第110-116页 |
| 攻读博士期间撰写的论文 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 卷内备考表 | 第118页 |
