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人去乙酰化酶SIRT1的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
目录第8-11页
英文缩写词表第11-12页
第1章 前言第12-28页
    1.1 基因工程重组蛋白在大肠杆菌中的表达第12-13页
    1.2 融合蛋白表达技术第13-15页
    1.3 组蛋白修饰第15页
    1.4 SIRT1 的研究进展第15-28页
        1.4.1 组蛋白去乙酰化酶第15-16页
        1.4.2 Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶-Sirtuin 家族第16-20页
        1.4.3 SIRT1第20-28页
            1.4.3.1 SIRT1 的蛋白质结构与酶活性第20-21页
            1.4.3.2 SIRT1 的生理学功能第21-25页
            1.4.3.3 SIRT1 与肿瘤第25-28页
第2章 载体构建第28-44页
    2.1 实验材料第28-30页
        2.1.1 主要仪器设备第28页
        2.1.2 菌种及载体第28页
        2.1.3 主要试剂第28-29页
        2.1.4 常用试剂的配制第29-30页
    2.2 实验方法第30-38页
        2.2.1 人 SIRT1 基因的克隆第30-38页
            2.2.1.1 SIRT1 基因的引物设计第30-32页
            2.2.1.2 SIRT1 基因的克隆第32-34页
            2.2.1.3 pGEM-T/SIRT1 重组克隆质粒的构建第34-38页
        2.2.2 pET28b/SIRT1 重组表达质粒构建第38页
    2.3 实验结果与讨论第38-42页
        2.3.1 SIRT1 片段的 PCR 扩增第38-40页
        2.3.2 重组克隆载体 pGEM-T/SIRT1 的酶切鉴定第40-41页
        2.3.3 重组质粒 pET28b/SIRT1 的酶切鉴定及序列测定第41-42页
    2.4 本章小结第42-44页
第3章 重组蛋白的表达与纯化第44-56页
    3.1 实验材料第44-46页
        3.1.1 主要仪器设备第44页
        3.1.2 主要试剂第44页
        3.1.3 常用试剂的配制第44-46页
    3.2 实验方法第46-51页
        3.2.1 SIRT1/pET28b 在 E.coli BL21(DE3)中的表达第46-47页
            3.2.1.1 重组质粒表达宿主菌的转化第46页
            3.2.1.2 IPTG 诱导重组蛋白表达第46-47页
        3.2.2 表达蛋白的提取第47页
        3.2.3 IMAC 法纯化重组蛋白第47-48页
        3.2.4 融合蛋白的定量估算第48-49页
        3.2.5 目的蛋白表达纯化结果检测第49-51页
            3.2.5.1 10%SDS-PAGE 蛋白电泳第49-50页
            3.2.5.2 Western Blot 检测第50-51页
    3.3 实验结果与讨论第51-55页
        3.3.1 诱导表达产物的鉴定第51-52页
        3.3.2 IMAC 纯化重组蛋白第52-53页
        3.3.3 目的蛋白浓度及收率测定第53-54页
        3.3.4 纯化后目的蛋白检测第54-55页
    3.4 本章小结第55-56页
第4章 重组蛋白的活性检测第56-59页
    4.1 实验材料第56页
        4.1.1 主要试剂及耗材第56页
        4.1.2 常用试剂的配制第56页
    4.2 实验方法第56-57页
        4.2.1 重组蛋白 SIRT1 的酶底物设计第56-57页
        4.2.2 重组蛋白的活性检测第57页
    4.3 实验结果与讨论第57-58页
    4.4 本章小结第58-59页
结论第59-61页
参考文献第61-66页
个人简历第66-67页
致谢第67页

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