| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 英文缩写词表 | 第11-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-28页 |
| 1.1 基因工程重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第12-13页 |
| 1.2 融合蛋白表达技术 | 第13-15页 |
| 1.3 组蛋白修饰 | 第15页 |
| 1.4 SIRT1 的研究进展 | 第15-28页 |
| 1.4.1 组蛋白去乙酰化酶 | 第15-16页 |
| 1.4.2 Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶-Sirtuin 家族 | 第16-20页 |
| 1.4.3 SIRT1 | 第20-28页 |
| 1.4.3.1 SIRT1 的蛋白质结构与酶活性 | 第20-21页 |
| 1.4.3.2 SIRT1 的生理学功能 | 第21-25页 |
| 1.4.3.3 SIRT1 与肿瘤 | 第25-28页 |
| 第2章 载体构建 | 第28-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第28页 |
| 2.1.2 菌种及载体 | 第28页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.2.1 人 SIRT1 基因的克隆 | 第30-38页 |
| 2.2.1.1 SIRT1 基因的引物设计 | 第30-32页 |
| 2.2.1.2 SIRT1 基因的克隆 | 第32-34页 |
| 2.2.1.3 pGEM-T/SIRT1 重组克隆质粒的构建 | 第34-38页 |
| 2.2.2 pET28b/SIRT1 重组表达质粒构建 | 第38页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第38-42页 |
| 2.3.1 SIRT1 片段的 PCR 扩增 | 第38-40页 |
| 2.3.2 重组克隆载体 pGEM-T/SIRT1 的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3.3 重组质粒 pET28b/SIRT1 的酶切鉴定及序列测定 | 第41-42页 |
| 2.4 本章小结 | 第42-44页 |
| 第3章 重组蛋白的表达与纯化 | 第44-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第44-46页 |
| 3.1.1 主要仪器设备 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 常用试剂的配制 | 第44-46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-51页 |
| 3.2.1 SIRT1/pET28b 在 E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第46-47页 |
| 3.2.1.1 重组质粒表达宿主菌的转化 | 第46页 |
| 3.2.1.2 IPTG 诱导重组蛋白表达 | 第46-47页 |
| 3.2.2 表达蛋白的提取 | 第47页 |
| 3.2.3 IMAC 法纯化重组蛋白 | 第47-48页 |
| 3.2.4 融合蛋白的定量估算 | 第48-49页 |
| 3.2.5 目的蛋白表达纯化结果检测 | 第49-51页 |
| 3.2.5.1 10%SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第49-50页 |
| 3.2.5.2 Western Blot 检测 | 第50-51页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第51-55页 |
| 3.3.1 诱导表达产物的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.2 IMAC 纯化重组蛋白 | 第52-53页 |
| 3.3.3 目的蛋白浓度及收率测定 | 第53-54页 |
| 3.3.4 纯化后目的蛋白检测 | 第54-55页 |
| 3.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第4章 重组蛋白的活性检测 | 第56-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第56页 |
| 4.1.1 主要试剂及耗材 | 第56页 |
| 4.1.2 常用试剂的配制 | 第56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 4.2.1 重组蛋白 SIRT1 的酶底物设计 | 第56-57页 |
| 4.2.2 重组蛋白的活性检测 | 第57页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第57-58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 个人简历 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
