摘要 | 第5-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
0 前言 | 第11-36页 |
1.紫菜的生物学特征 | 第11-12页 |
2.质体遗传转化技术研究进展 | 第12-25页 |
2.1. 质体遗传转化的原理 | 第12-21页 |
2.1.1. 同源重组片段 | 第13页 |
2.1.2. 抗性筛选标记 | 第13-14页 |
2.1.3. 调控序列 | 第14页 |
2.1.4. 同质化 | 第14-17页 |
2.1.5. 质体遗传化可诱导表达系统和筛选标记的去除 | 第17-21页 |
2.2. 质体遗传转化的方法 | 第21-23页 |
2.2.1. 基因枪法 | 第21页 |
2.2.2. PEG 介导法 | 第21-22页 |
2.2.3. 花粉管导入法 | 第22页 |
2.2.4. 农杆菌介导转化法 | 第22页 |
2.2.5. 激光微束及显微注射法 | 第22页 |
2.2.6. 转运肽介导的质体间接转化法 | 第22-23页 |
2.3. 质体遗传转化的优势 | 第23页 |
2.4. 目前成功开发质体遗传转化技术的应用 | 第23-25页 |
2.4.1. 质体遗传转化技术在基础研究方面应用 | 第23页 |
2.4.2. 质体遗传转化技术在植物性状改良和生物反应器方面的应用 | 第23-25页 |
2.5. 存在问题 | 第25页 |
2.5.1. 叶绿体的同质化问题 | 第25页 |
2.5.2. 选择标记基因 | 第25页 |
3.紫菜遗传转化研究进展 | 第25-28页 |
3.1. 紫菜瞬时表达技术研究进展 | 第26页 |
3.2. 紫菜核遗传转化技术研究进展 | 第26-27页 |
3.3. 紫菜其它遗传转化技术研究进展 | 第27-28页 |
4.质体基因组研究进展 | 第28-29页 |
5.本工作的目的意义 | 第29-36页 |
第一部分 条斑紫菜质体遗传转化载体构建 | 第36-59页 |
1.材料与方法 | 第36-47页 |
1.1. 材料 | 第36页 |
1.1.1. 材料 | 第36页 |
1.1.2. 菌种和质粒 | 第36页 |
1.1.3 酶及生物学试剂 | 第36页 |
1.2. 方法 | 第36-47页 |
1.2.1. 总 DNA 的提取 | 第36-37页 |
1.2.2. 含 rrsB-trnI-trnA-rrsL 同源重组片段的骨架载体的构建 | 第37-39页 |
1.2.3. 含抗生素筛选基因表达盒的条斑紫菜质体表达载体的构建 | 第39-42页 |
1.2.4. 含报告基因(EGFP)表达盒的条斑紫菜质体表达载体的构建 | 第42-44页 |
1.2.5. 条斑紫菜质体基因组定点整合表达载体的构建 | 第44-47页 |
2.结果与分析 | 第47-56页 |
2.1. 总 DNA 的提取 | 第47页 |
2.2. 含 rrsB-trnI-trnA-rrsL 同源重组片段的骨架载体的构建 | 第47-49页 |
2.2.1. 条斑紫菜质体同源重组片段 rrsB-trnI-trnA-rrsL 的克隆 | 第47-48页 |
2.2.2. 酶切连接 | 第48-49页 |
2.3. 构建含抗生素筛选基因表达盒的条斑紫菜质体表达载体 | 第49-52页 |
2.3.1. 条斑紫菜 psbA 序列扩增和克隆 | 第49-50页 |
2.3.2. 抗生素筛选基因(氯霉素抗性基因 cat)的克隆 | 第50-51页 |
2.3.3. 酶切连接 | 第51-52页 |
2.4. 含报告基因(EGFP)表达盒的条斑紫菜质体表达载体的构建 | 第52-54页 |
2.4.1. EGFP 基因的扩增和克隆 | 第52页 |
2.4.2. 酶切连接 | 第52-53页 |
2.4.3 .pYG 载体在大肠杆菌中的初步表达检测 | 第53-54页 |
2.5. 构建条斑紫菜质体基因组定点整合表达载体 | 第54-56页 |
2.5.1. 含有筛选基因表达盒的条斑紫菜质体基因组定点整合表达载体构建 | 第54-55页 |
2.5.2. 含有筛选基因表达盒的条斑紫菜质体基因组定点整合表达载体在大肠杆菌中的表达验证 | 第55-56页 |
3.讨论 | 第56-59页 |
第二部分 基因枪法对条斑紫菜质体遗传转化体系的初建 | 第59-67页 |
1.材料与方法 | 第59-61页 |
1.1. 材料 | 第59页 |
1.2. 方法 | 第59-61页 |
1.2.1. 材料培养 | 第59页 |
1.2.2. 质粒提取 | 第59页 |
1.2.3. 基因枪子弹的制备 | 第59-60页 |
1.2.4. 基因枪转化 | 第60-61页 |
2.结果与分析 | 第61-64页 |
3.讨论 | 第64-67页 |
总结 | 第67-69页 |
参考文献 | 第69-74页 |
附录 | 第74-75页 |
致谢 | 第75-76页 |
个人简历 | 第76-77页 |