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条斑紫菜(Pyropia yezoensis)质体遗传转化体系构建

摘要第5-6页
Abstract第6-7页
0 前言第11-36页
    1.紫菜的生物学特征第11-12页
    2.质体遗传转化技术研究进展第12-25页
        2.1. 质体遗传转化的原理第12-21页
            2.1.1. 同源重组片段第13页
            2.1.2. 抗性筛选标记第13-14页
            2.1.3. 调控序列第14页
            2.1.4. 同质化第14-17页
            2.1.5. 质体遗传化可诱导表达系统和筛选标记的去除第17-21页
        2.2. 质体遗传转化的方法第21-23页
            2.2.1. 基因枪法第21页
            2.2.2. PEG 介导法第21-22页
            2.2.3. 花粉管导入法第22页
            2.2.4. 农杆菌介导转化法第22页
            2.2.5. 激光微束及显微注射法第22页
            2.2.6. 转运肽介导的质体间接转化法第22-23页
        2.3. 质体遗传转化的优势第23页
        2.4. 目前成功开发质体遗传转化技术的应用第23-25页
            2.4.1. 质体遗传转化技术在基础研究方面应用第23页
            2.4.2. 质体遗传转化技术在植物性状改良和生物反应器方面的应用第23-25页
        2.5. 存在问题第25页
            2.5.1. 叶绿体的同质化问题第25页
            2.5.2. 选择标记基因第25页
    3.紫菜遗传转化研究进展第25-28页
        3.1. 紫菜瞬时表达技术研究进展第26页
        3.2. 紫菜核遗传转化技术研究进展第26-27页
        3.3. 紫菜其它遗传转化技术研究进展第27-28页
    4.质体基因组研究进展第28-29页
    5.本工作的目的意义第29-36页
第一部分 条斑紫菜质体遗传转化载体构建第36-59页
    1.材料与方法第36-47页
        1.1. 材料第36页
            1.1.1. 材料第36页
            1.1.2. 菌种和质粒第36页
            1.1.3 酶及生物学试剂第36页
        1.2. 方法第36-47页
            1.2.1. 总 DNA 的提取第36-37页
            1.2.2. 含 rrsB-trnI-trnA-rrsL 同源重组片段的骨架载体的构建第37-39页
            1.2.3. 含抗生素筛选基因表达盒的条斑紫菜质体表达载体的构建第39-42页
            1.2.4. 含报告基因(EGFP)表达盒的条斑紫菜质体表达载体的构建第42-44页
            1.2.5. 条斑紫菜质体基因组定点整合表达载体的构建第44-47页
    2.结果与分析第47-56页
        2.1. 总 DNA 的提取第47页
        2.2. 含 rrsB-trnI-trnA-rrsL 同源重组片段的骨架载体的构建第47-49页
            2.2.1. 条斑紫菜质体同源重组片段 rrsB-trnI-trnA-rrsL 的克隆第47-48页
            2.2.2. 酶切连接第48-49页
        2.3. 构建含抗生素筛选基因表达盒的条斑紫菜质体表达载体第49-52页
            2.3.1. 条斑紫菜 psbA 序列扩增和克隆第49-50页
            2.3.2. 抗生素筛选基因(氯霉素抗性基因 cat)的克隆第50-51页
            2.3.3. 酶切连接第51-52页
        2.4. 含报告基因(EGFP)表达盒的条斑紫菜质体表达载体的构建第52-54页
            2.4.1. EGFP 基因的扩增和克隆第52页
            2.4.2. 酶切连接第52-53页
            2.4.3 .pYG 载体在大肠杆菌中的初步表达检测第53-54页
        2.5. 构建条斑紫菜质体基因组定点整合表达载体第54-56页
            2.5.1. 含有筛选基因表达盒的条斑紫菜质体基因组定点整合表达载体构建第54-55页
            2.5.2. 含有筛选基因表达盒的条斑紫菜质体基因组定点整合表达载体在大肠杆菌中的表达验证第55-56页
    3.讨论第56-59页
第二部分 基因枪法对条斑紫菜质体遗传转化体系的初建第59-67页
    1.材料与方法第59-61页
        1.1. 材料第59页
        1.2. 方法第59-61页
            1.2.1. 材料培养第59页
            1.2.2. 质粒提取第59页
            1.2.3. 基因枪子弹的制备第59-60页
            1.2.4. 基因枪转化第60-61页
    2.结果与分析第61-64页
    3.讨论第64-67页
总结第67-69页
参考文献第69-74页
附录第74-75页
致谢第75-76页
个人简历第76-77页

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